在线μSPE-μGPC-GCMS法检测茶叶中44种农药

茶在我国有着悠久的历史，中国是最早将茶作为饮品而饮用的国家，茶叶在中国有着特殊的历史地位。随着人们的健康意识的逐渐增强，日常吃的瓜果蔬菜都开始讲究有机绿色，而茶作为中国最早的农产品之一，近些年来其安全问题也越来越受到关注。茶叶中农药最大残留限量大幅降低，限量标准日趋严格，且残留检测项目不断增加。为此，建立一种高效的茶叶检测方法，具有极大的实际应用价值。

茶叶的基质复杂，在实际检测过程中，净化过程尤为重要。常规茶叶检测方法中以SPE净化为主，也有用GPC净化的，但是大多都是二者只用其一，很少有两种方法联用。

本方法参考《GB/T 23376-2009 茶叶中农药多残留测定 气相色谱/质谱法》，使用HPSE对茶叶样品进行萃取，然后再进行在线μSPE-μGPC联用方法净化，最后用GCMS进行检测，实验中对44种农药进行了加标检测，回收率为74.6%~100.4%，RSD 1.5%~13.9%。本方法使用在线的μSPE和在线的μGPC代替了常规SPE及常规GPC，且实现了二者的在线联用，真正的实现了从净化到分析的全自动过程，大大提高了工作效率。常规SPE和常规GPC净化需要用到大量溶剂，净化后还需要再浓缩，不仅费时费力，且费溶剂。而在线μSPE和在线μGPC联用净化过程，溶剂使用量单个样品仅为约10mL，且本方法通过结合气相大体积进样功能，在净化后无需再进行浓缩，节省了大量的浓缩时间，且减少了由于多次浓缩转移而产生的目标物损失。

AStation全自动多功能样品制备进样平台，莱伯泰科公司；

μGPC在线微量凝胶净化模块，莱伯泰科公司；

μSPE在线微固相萃取模块，莱伯泰科公司；

HPSE高效快速溶剂萃取系统，莱伯泰科公司；

MV5多通道平行浓缩仪，莱伯泰科公司；

7890B-5977B气质联用仪，安捷伦公司

标样液：44种农药标准物质，国家标准物质；

农药标准工作液：将44种农药标准物质配置成所有组分浓度均为2ug/mL的混标工作液；

乙腈，二氯甲烷，丙酮，正己烷，环己烷（色谱纯， Fisher Chemical）

μSPE小柱：ITSP, UCT Florisil PR, 30mg

3.1 茶叶提取

称取1.000g茶叶样品（事先用粉碎机粉碎）和3.4g硅藻土（在马弗炉400℃下保持4h，降至室温后使用）于称量舟内，将两者混匀，并装填至HPSE（高效快速溶剂萃取系统）的10mL萃取罐中，装填好后将萃取罐置于HPSE仪器内，按3.1.1 HPSE萃取条件进行萃取。萃取液用氮吹浓缩仪氮吹至近干，用丙酮+正己烷（2+8，v/v）溶液溶解，并定容至1mL，待净化。

3.1.1 HPSE萃取条件

溶剂：乙腈+二氯甲烷（1+1, v/v），压力：10.34MPa，温度：100℃，加热平衡：5min，萃取时间：5min，冲洗体积：60%，氮吹时间：100s，循环次数：1次。

3.2样品加标

3.1萃取液吹至近干后，先加入50μL的农药标准工作液，然后用丙酮+正己烷（2+8，v/v）定容至1mL，加标浓度为0.1 mg/kg。

3.3在线μSPE-μGPC联用净化

3.3.1 μSPE方法

图1μSPE过程

3.3.2 μGPC方法

色谱柱：Shodex CLNpak EV-200凝胶渗透色谱柱，2mm*150mm；

流速0.1mL/min；流动相：丙酮3:7环己烷（V/V）；柱温40℃；

收集时间窗：2m50s~6m58s；收集体积：300μL

3.4 GC-MS检测条件

3.4.1 气相条件

色谱柱：HP-5ms  30m*0.25mm*0.25μm；

进样口温度：80℃，保持0.15min，以600℃/min，升至280℃，保持35min；

溶剂放空模式：

出口流量：100mL/min，放空压力：3psi，放空时间：0.15min，不分流进样：1.5min，分流流量；80mL/min；

柱流速：1mL/min（恒流）；

进样量：20μL；

柱箱温度：50℃，保持2min，以30℃/min升温至120℃，保持1min，以12℃/min升温至180℃，保持5min，以3℃/min升温至220℃，最后以7℃/min升温至245℃并保持3min。

后运行：280℃，5min。

3.4.2 质谱条件

四极杆温度：150℃；离子源温度：280℃；传输线温度：290℃；

扫描模式：选择离子扫描（SIM），44种农药标准物质的主要特征离子参见表1；

溶剂延迟时间：7min。

表1 44种农药的出峰顺序及主要特征离子

4.1 44种农药混标SIM色谱图

图2为44种农药混标SIM色谱图。

图244种农药混标SIM色谱图

4.2样品净化效果对比

图3为茶叶萃取液在经过μSPE-μGPC净化前后的对比图。从图中可看出净化后色谱图的整体基线比未净化的要低且平整，尤其是在16~18min处，减小了近一半的咖啡因峰，降低了干扰。

图3空白样品色谱图

4.3 加标样品色谱图

图4为加标样品的色谱图。

图4 加标样品色谱图

4.4 加标回收率

由于GCMS检测实际样品时，对农药响应存在基质效应，所以实验中是用空白基质配标的。表2为6个加标样品的加标回收率结果，44种农药的加标回收率在74.6%~100.4%，RSD 1.5%~13.9%。

表2 茶叶中44种农药的加标回收率结果

方法采用HPSE高效溶剂萃取对茶叶进行萃取，然后再进行在线μSPE-μGPC净化，最后用GCMS进行检测，实验中对44种农药进行了加标检测，回收率为74.6%~100.4%，RSD 1.5%~13.9%。