长时间活细胞动态成像方法，实时监测细胞划痕/迁移实验，平行对比多组处理手段研究对肿瘤细胞迁移能力

实验内容：将L929小鼠成纤维细胞系以120000个细胞/孔的密度接种于24孔板中培养24小时。然后，使用10µl枪头或其他硬物在融合的细胞单层中制造划痕（图1），并用磷酸盐缓冲液冲洗两次。加入新鲜细胞培养基，将24孔细胞培养板置于培养箱中的zenCELL owl 设备上培养约24小时。每隔10分钟拍摄一次照片，并根据所得数值计算细胞覆盖率。

图 1. 细胞划痕实验

实验结果：细胞从划痕边缘扩散移动，结果显示，划痕在24小时后几乎完全愈合（图2）。细胞从划痕边缘扩散移动。图片中可见零星的细胞分裂，为了防止细胞增殖干扰迁移的测量，可以通过添加放线菌素C等药物或去除生长因子（如血清）来抑制增殖。细胞覆盖率数据与伤口愈合过程图像一致（图3）。实验开始后24小时内，该区域的细胞覆盖率在从50%上升到90%。利用细胞覆盖数据计算相对间隙面积（图4）可以确定间隙半闭合的时间点（t1/2间隙闭合）。

图2. 培养24小时后，划痕几乎完全愈合

图3. 划痕愈合过程中的细胞覆盖度变化

图4. 相对间隙面积变化

以上案例显示，zenCELL owl活细胞动态成像及分析系统在细胞划痕/迁移实验中的应用潜力，该设备兼具高通量，稳定、小巧、箱内原位监测等多种优势，可在伤口愈合过程的任意时间点对细胞迁移进行可视化与持续监测。

应用方向

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