聚焦食品氨基酸检测，解析天冬酰胺与谷氨酰胺含量测定

2026-06-03 11:42:43, 科诺美Chromai 科诺美（北京）科技有限公司

天冬酰胺和谷氨酰胺是两种重要的非必需氨基酸，参与蛋白质的合成。天冬酰胺主要存在于动植物组织中，在新陈代谢方面发挥着重要作用，而谷氨酰胺是氨基酸中比较丰富的一种，在肌肉组织中含量较高，有利于促进免疫功能。在食品领域，天冬酰胺和谷氨酰胺的含量测定具有重要意义，这是因为两种氨基酸不仅对食品的营养价值存在影响，还可以用于评估食品的品质。本方案参考《GB 5009.309-2025 食品安全国家标准食品中天冬酰胺和谷氨酰胺的测定》，天冬酰胺和谷氨酰胺与丹磺酰氯进行衍生反应，衍生物经C18柱分离，紫外检测器检测，建立了天冬酰胺和谷氨酰胺的检验方法。

实验部分

仪器设备：Leaps超高效液相色谱仪

P40四元梯度泵，A10C自动进样器，C10柱温箱，D10紫外可见光检测器

溶液配制

天冬酰胺标准储备液(2.00mg/mL)：准确称取100mg(精确至0.0001g)天冬酰胺标准品，用 20%甲醇溶液溶解并定容至50mL。

谷氨酰胺标准储备液(2.00mg/mL)：准确称取100mg(精确至0.0001g)谷氨酰胺标准品，用 20%甲醇溶液溶解并定容至50mL。

混合标准中间液(20.0μg/mL)：分别准确吸取天冬酰胺和谷氨酰胺标准储备液各1.00mL 于 100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。现配现用。

标准曲线配制：分别准确吸取适量混合标准中间液(20.0μg/mL)于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，获得质量浓度分别为0.500μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的曲线溶液。现配现用。

色谱条件

色谱柱：Lotus C18（4.6*250 mm, 5 μm）

流动相A：10 mmol/L磷酸氢二钠溶液

流动相B：甲醇

流速：1 mL/min

检测波长：247 nm

柱温：35℃

进样量：10 μL

实验结果

线性关系及检出限

依次将标准曲线溶液0.500μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL按浓度从低到高进样，以浓度-峰面积绘制标准曲线。天冬酰胺和谷氨酰胺衍生物在线性范围内相关性好，相关系数大于0.999。

表1 标准曲线结果表

重复性

将2.0µg/mL浓度的溶液重复进样6次，重复性结果如表2所示

表2 重复性结果表

样品及回收率测试

按照GB 5009.309-2025第一法中的直接提取法和酶解提取法分别对婴幼儿配方奶粉及加标样品（加标浓度为1mg/g）进行前处理，前者用于测定奶粉样品中游离态天冬酰胺和游离态谷氨酰胺的含量，后者用于测定奶粉样品中天冬酰胺和谷氨酰胺的总量。

结果如表3所示，由于奶粉样品中未额外添加天冬酰胺和谷氨酰胺，所以使用直接提取法进行前处理，没有检测到游离态的天冬酰胺和谷氨酰胺，如图2所示。通过酶解提取法测奶粉样品中天冬酰胺和谷氨酰胺的总量，如图3所示

表3 加标回收率数据表

图2 直接提取法---加标样品（红色）与本底（绿色）叠加色谱图

（1-天冬酰胺衍生物；2-谷氨酰胺衍生物）

图3 酶解提取法---加标样品（红色）与本底（绿色）叠加色谱图

（1-天冬酰胺衍生物；2-谷氨酰胺衍生物）

结论

本应用使用Leaps超高效液相色谱仪，参考《GB 5009.309-2025食品安全国家标准食品中天冬酰胺和谷氨酰胺的测定》，建立了分析食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的检测方法。经测试，两种化合物的标准曲线线性良好，相关系数均大于0.999；保留时间重复性和峰面积重复性符合要求；用两种前处理方法进行奶粉样品和加标回收率测试，回收率在85%-105%之间。该方法稳定可靠，灵敏度高，满足食品安全国家标准检测要求。

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