2026-05-08 10:52:12, 技尔 GL Sciences 技尔(上海)商贸有限公司
液相反相方法开发中,有时会用到离子对试剂,以提高对离子化合物的保留。
如上图所示,流动相中添加离子对主要是可以产生与目标物质电荷相反的离子。这种离子与目标离子结合形成疏水型离子对化合物,从而使目标物在色谱柱上有更好的保留效果来实现分离。
所以,我们可以得出以下结论 ↓
对于带正电的目标物
需要使用带负电的离子对试剂,如烷基磺酸盐
对于带负电的目标物
需要使用带正电的试剂,如四丁基铵盐
离子对试剂的使用需要注意哪些事项?
01
流动相的pH
目标物的pKa和流动相的pH会影响目标物的电离状态,根据已知目标物的pKa,应调整流动相的pH使目标物处于电离状态。如某酸性目标物pKa为3.0,则流动相pH可调整为5.0以上,让离子对试剂可充分与目标物结合。
02
离子对的疏水性
长链离子对试剂可增强保留但也会影响峰形;短链离子对试剂保留稍弱但峰形更佳。例如十二烷基磺酸钠比庚烷磺酸钠的疏水性强,可能保留时间更长。一般需优先选用碳链短的离子对试剂,这样也可以有效减弱离子对试剂强保留对色谱柱产生的不利影响。
03
离子对的浓度
建议在5-20mM之间,浓度太低可能无法形成有效离子对,浓度太高可能导致溶解问题及干扰检测器,高浓度离子对也会加速柱子的劣化。另外还需注意长链离子对试剂在乙腈中溶解度较低。
04
离子对与检测器的匹配性
用在质谱方法的离子对试剂需要有较好挥发性,比如七氟丁酸(HFBA)或三氟乙酸(TFA),而常规的紫外检测器可以使用非挥发性的试剂,如十二烷基磺酸钠,但需考虑其紫外吸收是否会影响基线。
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