食品中抗坏血酸检测:L型与D型如何精准测定?

2026-03-27 10:23:56, 科诺美Chromai 科诺美(北京)科技有限公司


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L-抗坏血酸又名维生素C,是一种水溶性维生素,具有很强的还原性。参与机体复杂的代谢过程,能促进生长和增强对疾病的抵抗力,可用作营养增补剂、抗氧化剂,也可用作小麦粉改良剂。D-异抗坏血酸与L-抗坏血酸有相似的化学性质,属于水溶性抗氧化剂。D-异抗坏血酸可以防止肉类制品、鱼肉制品、鲸肉制品、鱼贝腌制品、鱼贝冷冻品等的变质,或与亚硝酸盐、硝酸盐合用提高肉类制品的发色效果。但L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸的过量补充对健康无益,反而有害,会刺激胃肠道、引起尿路结石和诱发痛风,故需要合理使用。本方案参考《GB 5009.86-2025 食品中抗坏血酸的测定》,对某品牌的可乐进行了抗坏血酸含量的测定。





01
实验部分


仪器设备:Leaps超高效液相色谱仪

P60输液泵、A10C自动进样器、C10柱温箱、D10紫外检测器

标准溶液配制

L-抗坏血酸标准溶液(50 μg/mL):准确称取L-抗坏血酸标准品10 mg(精确至0.1 mg),用TCEP溶液溶解并定容至10mL,混匀。准确吸取上述标准溶液500 μL于10 mL棕色容量瓶中,用TCEP溶液定容,混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中。临用现配。


D-异抗坏血酸标准溶液(50 μg/mL):准确称取D-异抗坏血酸标准品10 mg(精确至0.1 mg),用TCEP溶液溶解并定容至10mL,混匀。准确吸取上述标准溶液500 μL于10 mL棕色容量瓶中,用TCEP溶液定容,混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中。临用现配。


标准工作溶液配制:分别准确吸取L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液(50 μg/mL)适量,用流动相稀释成标准工作溶液,浓度分别为0.05 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10 μg/mL。临用现配。

色谱条件

色谱柱:Lotus C18(4.6 mm*150 mm,5 μm)

柱温:30 ℃

进样体积:20 μL

波长:265 nm

流动相:量取水900 mL于烧杯中,吸取40% TBAH溶液3.25 mL、称取乙酸铵3.85 g置于水中,然后加入TCEP 50 mg(或L-半胱氨酸溶液20 mL),再加入乙腈 10 mL,混匀后用冰乙酸(约3.14 mL)调pH至 4.5~5.0;最后加水稀释至1L,混匀;超声除去气泡。     

流速:1.0 mL/min

02
实验结果
标准溶液谱图



如图1所示,L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸对称因子均为1.1,分离度达到1.9。

图1  L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液色谱图

(1—L-抗坏血酸; 2—D-异抗坏血酸)  


线性及检出限



表1  L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准曲线结果表


重复性



将2 μg/mL浓度的标准溶液进样6次,重复性结果如表2所示

表2  L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸重复性结果表

回收率



对某品牌的可乐进行样本处理测试,L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸均未检出。在可乐样品中添加浓度为1 μg/mL的抗坏血酸,L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸的回收率分别为109%和111%。


图2  L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸加标溶液色谱图


03
结论

本应用使用Leaps超高效液相色谱仪,参考《GB 5009.86-2025 食品中抗坏血酸的测定》进行了方法学考察,线性相关系数大于0.999;L-抗坏血酸保留时间重复性为0.11%,峰面积重复性为0.39%,D-异抗坏血酸保留时间重复性为0.11%,峰面积重复性为0.90%;可乐样品中L-抗坏血酸加标回收率为109%,D-异抗坏血酸加标回收率为111%。仪器操作简单,稳定性好,灵敏度高,满足食品中L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸含量的测定要求。


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科诺美(英文:Chromai)作为中国高端科学仪器与医疗诊断设备的领先者,秉承着让分析检测更高效精准且易用的使命,坚持正向自主研发与持续创新,拥有领先的先进技术,众多核心的专利技术,专注于科学仪器与自动化和智能化的充分结合,产品与解决方案广泛应用于全球多应用领域客户。公司是国家高新技术企业、中国仪器仪表学会、中国分析测试协会、中国医疗器械行业协会等组织会员。致力于让中国创造享誉全球,成为推动世界和人类健康安全进步的中国科技公司,不断提升效率、降低分析成本,为客户创造价值。






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