为什么越来越多的CGT项目选择HTRF/AlphaLISA检测p24？

《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》1.4 含量

病毒载体类产品可通过诸如总颗粒数、基因组拷贝数、结构蛋白含量、感染性滴度或感染性颗粒数等检测确定病毒含量。

《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》第四章第11条

除病毒转导滴度外，还可通过检测病毒载体特定抗原或病毒基因拷贝数来检测病毒载体的物理滴度，如慢病毒载体p24抗原含量的检测。

《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》4.1.3 病毒载体滴度

滴度是病毒载体生物学活性和含量的重要检测项目，可用于工艺过程监控和放行检测，需选择灵敏度、准确度、精密度等符合要求的检测方法开展研究。鼓励采用多种方法进行滴度的检测，并探索不同方法检测数值的相关性。

瑞孚迪基于AlphaLISA和HTRF技术平台，提供p24蛋白高通量检测试剂盒。相比传统ELISA，均相检测方法拥有约4个检测范围的线性区间，可有效减少稀释、洗板等过程导致的结果偏差，提高结果准确度和检测效率。

HTRF检测原理

如图2所示，采用Eu标记与d2标记的抗HIV p24抗体，通过夹心法检测HIV p24抗原。当两种标记抗体结合抗原并相互靠近时，激发供体可发生荧光共振能量转移（FRET），使受体在665 nm处发出荧光，其信号强度与HIV p24浓度成正比。

图2. HTRF检测原理

AlphaLISA检测原理

如图3所示，分别标记有供体微珠和受体微珠的两种抗体同时与目标分析物结合，使两种微珠相互靠近。激发供体微珠产生的单线态氧可激活邻近的受体微珠并在615 nm处产生信号，其信号强度与分析物浓度成正比。

图3. AlphaLISA检测原理

更宽的动态范围

如图4所示，AlphaLISA技术可提供高达4个数量级的动态范围，远超ELISA的约2个数量级。无需反复预实验，一次检测即可准确定量差异巨大的样本，也可有效避免hook效应。

图4. 检测范围（左：HTRF 52~10000pg/ml；右：AlphaLISA 10~100000pg/ml）

更便捷与高通量

免洗操作步骤大幅简化流程和减少误差，检测流程约2h，易于实现自动化，兼容384孔板甚至更高通量的格式。

图5. 检测流程（左：HTRF；右：AlphaLISA）

更少的样本消耗

HTRF仅需16μl，AlphaLISA仅需1~5μL样本，对于珍贵样本（如临床前病毒样品）尤为友好。

图6. AlphaLISA检测体系

同等的准确性

研究证实，在最佳检测范围内，AlphaLISA与ELISA所测得的p24滴度结果高度一致，确保了数据的可靠性。

图7. p24 AlphaLISA与ELISA检测结果