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上海迪奥生物科技有限公司与浙江大学、华东师范大学强强合作,建立了大规模测序、生物信息、克隆、农业基因组等技术平台。我们提供动植物全基因组测序、重测序、转录组测序、数字基因表达谱、小RNA测序、ChIP-测序、MeDIP-测序、Bisulfite-测序、以及遗传图谱构建等服务,可广泛应用于全球相关领域内的科研院所、生物技术公司等。我们努力帮助您实现科研目标,致力于与广大科研工作者一起推动生命科学发展!
Illumina Solexa测序原理
1. 文库制备
将基因组DNA打断成几百个碱基(或更短)的小片段,并在两个末端加上接头(adapter)
2. 桥式PCR产生DNA簇
IIIumina高通量测序芯片表面连接有一层单链引物,两端连接测序接头的单链DNA片段通过与芯片表面的引物碱基互补结合,引物扩增成为双链后,使双链变性成为单链,该单链DNA的一端就被“固定”在芯片上,而单链DNA的另一端随机和附近的另外一个引物互补,也被“固定”住,行成“桥(bridge)”。经过反复30轮扩增后,每个单分子得到了约1000倍扩增,成为单克隆“DNA簇”。
3. 利用可逆化学阻断技术测序
利用边合成边测序(Sequencing by synthesis)的原理,加入改造过的DNA聚合酶和带有4种荧光标记的dNTP。这些核苷酸是“可逆终止子”,其3’羟基末端带有可化学切割的部分,每个循环只容许掺入单个碱基。去除其他多余的dNTP后,用激光扫描反应板表面,读取每条模板序列第一轮反应聚合上去的核苷酸种类。随后将这种基团化学切割,恢复3’端粘性,继续聚合第二个核苷酸。如此循环,直到每条模板序列都完全被聚合为双链。统计每轮收集到的荧光信号,就可得知每个模板DNA片段的序列。
4. 数据分析
自动读取碱基,数据被转移到自动分析通道进行二次分析。
Illumina Solexa测序原理,
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