等电点是一个分子表面不带电荷时的pH值。蛋白质是两性电解质,其等电点和它所含的酸性氨基酸和碱性氨基酸的数量比例有关。当溶液在某一特定pH值的条件下,蛋白质所带正电荷与负电荷恰好相等(总净电荷为零)时,在电场中既不向阳极移动,也不向阴极移动。
随着现代医药工业的发展,出现了大量的蛋白质和多肽类药物分子,等电点是其重要的理化参数,对这些蛋白质多肽类药物分子等电点的分析已成为医药工业质量控制的重要环节。例如:在复合抗体药物的质量控制中,各单克隆抗体组分的含量是保证产品的药效、安全性和批间重复性的重要指标。由于各单克隆抗体通常具有较高比例的同源序列,其分子量、分子结构和理化性质非常接近,常用的多数分析方法如体积排阻色谱、毛细管凝胶电泳等方法均无法区分这些不同的单克隆抗体组分,因而不适用于复合抗体药物的组成和含量分析这一目的。等电点是单克隆抗体的固有性质之一,不同的单克隆抗体由于氨基酸组成、序列和空间结构不同,等电点通常具有明显的差异,因而可以利用不同单克隆抗体的等电点差异对其进行分离和定量。毛细管等电聚焦 (cIEF) 在毛细管电泳技术测定两性物质等电点的基础上,实现对样品中不同组分的等电点分离和检测。
电荷变化是测定单抗药物降解变灵敏快速的方法之一,已经被国内外生物制药企业广泛采用。
检测方法
全柱成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)为Proteinsimple创全景式动态等电聚焦分析技术,已经成为等电点检测及电荷异质性分析的行业金标准
实验仪器和材料
Proteinsimple公司Maurice快速全自动蛋白质表征分析系统
实验原理
通过毛细管等电聚焦电泳,将样本中蛋白质基于等电点不同而分离,280nm的紫外光照射下CCD检测器检测不同等电点蛋白质的光吸收峰,从而得到该样本中蛋白质的特征谱形。
利用iCIEF监视贮存过程中蛋白的电荷异质性,作为产品稳定性评估的一部分。结果显示,在3个月的存储期间(22℃),CRM197的酸性峰(pI 5.77和5.82)增加,而主峰(pI 5.9)降低
样品要求:蛋白纯度>90%;蛋白质量>100 μg,浓度0.5μg/μL以上。
青莲百奥生物药表征——等电点,生物药表征——等电点
青莲百奥生物药表征——等电点信息由北京青莲百奥生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于青莲百奥生物药表征——等电点报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。