产品名称：UltraBio™ Mouse IgG Magnetic Beads (小鼠IgG磁珠)

规格或纯度：BioReagent,for IP,10 mg/mL, Particle Size: 1 μm

应用：IP, Co-IP, 免疫沉淀

产品介绍：

本制品是由高品质的正常小鼠IgG与微米级羧基磁珠共价偶联而成，通常用作免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫沉淀(ChIP)等抗体相关实验时小鼠来源抗体磁珠的对照IgG磁珠。本小鼠IgG磁珠中的小鼠IgG为正常的小鼠IgG，是一种未经任何标记的非特异性IgG。本小鼠IgG磁珠作为对照磁珠时，可以排除IgG本身和特定目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合。 

产品特点

1.非特异吸附低：与国内外大多数的同类产品相比，本制品磁珠粒径小，不易产生非特异吸附。本制品每毫升 磁珠悬浊液含约10mg磁珠，含有不少于0.5mg小鼠IgG抗体，该磁珠基本不会识别任何抗原。使用量参考正常抗体免疫磁珠的用量。

2.使用便捷：本制品储存在特殊保护液中，不含甘油，可以通过磁性吸附实现快速高效的分离，无需离心操作 

使用说明

1. 样品的制备

a. 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。需要确保裂解液的pH为6-8。

b. 具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4ºC存放，随后即可用于免疫沉淀或免疫共沉淀、标签蛋白的纯化等操作。新制备的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作，如样品不能当天使用，也可适当分装后-80ºC冻存。

2. 小鼠IgG磁珠的准备

由于小鼠IgG磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。

a. 用移液器轻轻吹打重悬小鼠IgG磁珠，按照每500μl样品10μl或20μl磁珠悬浊液，取适量小鼠IgG磁珠至一洁净离心管中，加入1×TBS至最终体积为约0.5ml。

b. 用移液器轻轻吹打重悬小鼠IgG磁珠。磁分离，去除上清。重复上述步骤两次。

c. 按照初始体积的量，用1×TBS重悬小鼠IgG磁珠。

3. 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

a. 加入磁珠与孵育。按照每500μl蛋白样品加入10μl或20μl磁珠悬浊液的比例加入小鼠IgG磁珠，置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育2小时或4ºC孵育过夜。注：孵育过程中，如果磁珠发生聚团或呈片状属正常现象，不会影响实验结果。

b. 磁分离。孵育完毕后，磁分离，去除上清。注：可保留部分上清液，用于检测免疫沉淀的效果。

c. 洗涤。加入500μl的1×TBS，用移液器轻轻吹打重悬小鼠IgG磁珠。磁分离，去除上清。重复洗涤三次。注：也可通过检测洗涤上清液的OD280来判断是否洗涤完全，若OD280>0.05，应适当增加洗涤次数。

4. 洗脱

操作者可根据后期检测的需要选择不同的洗脱方法。变性洗脱适用于 Western blot 分析。非变性洗脱被中和后，适用于酶法或功能测定。

a. 变 性 洗 脱：

此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向洗涤后的样品中加入20 µL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液（可用5×上样缓冲液进行稀释）混合均匀，100℃加热10 min。待冷却后，置于磁力架上分离1min。收集上清，进行SDS-PAGE检测。

b. 非变 性 洗 脱：

此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向洗涤后的样品中加入50 µL 洗脱缓冲液 ，混匀后置于旋转混合仪上，室温孵育5分钟，孵育完毕后，置于磁力架上分离1min，将上清转移到新的离心管中，并立刻加入5μL Neutralization Buffer ，适当混匀，将洗脱产物pH调节至中性，用于后期功能分析。

注：

a.为了获得最大的洗脱效率，可重复该洗脱步骤若干次，并将相同样品合并。

b.洗脱并中和的蛋白及其复合物置于4ºC待用或者-20ºC或-80ºC长期保存。

c.酸性洗脱法虽然高效，但仍可能低于变性洗脱法。

d.由于目的蛋白的差异可能对酸性洗脱法的洗脱效率有一定的影响，如果对洗脱效率的要求比较高，可对洗脱液的pH进行一定的调整，相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整，具体需要自行优化相关实验条件。也可以考虑采用效率可能更高的多肽竞争洗脱法或效率预期最高的变性洗脱法，后者的缺点是在变性条件下进行洗脱，可能会对后续对于蛋白活性有要求的实验产生影响。

注意事项

1..本产品需维持pH为6-8，避免高速离心和干燥；请勿长时间置磁珠于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

2.本产品使用前要适当充分重悬，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免抗体变性等。

3.在免疫沉淀或纯化时，建议设置阳性和阴性对照组。

4.蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4ºC或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物。

5.如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

6.酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集，属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂（如Triton X-100、Tween-20或NP-40）可有效防止磁珠聚集，并且不会影响磁珠的抗体结合效率。

7.高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液或NP-40裂解液等都完全适用。

8.本产品仅限于专业人员科研使用。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

级别：BioReagent, for IP

储存缓冲液：0.01M sodium phosphateand 0.02% ProClin 300; pH 7.2

浓度：10 mg/mL, Particle Size: 1 μm

储存条件：2-8°C储存,禁止冷冻

运输条件：低温运输,禁止冷冻

稳定性与储存：2-8ºC保存，一年有效

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