产品名称：UltraBio™ Mouse IgG Agarose (小鼠IgG琼脂糖凝胶)

规格或纯度：BioReagent,for IP,50% v/v

应用：IP, Protein purification, 免疫沉淀

产品介绍：

阿拉丁生产的 UltraBio™ Mouse IgG Agarose (小鼠IgG琼脂糖凝胶) ，由高品质的未经任何标记的非特异性小鼠IgG (non-specific IgG) 与4%琼脂糖凝胶共价偶联制成。本产品通常用作免疫沉淀（ Immunoprecipitation, IP ）、免疫共沉淀（ Co-IP ）、染色质免疫沉淀（ Chromatin immunoprecipitation, ChIP ）等免疫沉淀相关实验时小鼠来源抗体琼脂糖凝胶如Anti-Flag Affinity Gel 等的阴性对照 （ Negative control ）。本小鼠IgG琼脂糖凝胶中的小鼠IgG (Mouse IgG)为正常的小鼠IgG (Normal Mouse IgG)，是一种未经任何标记的非特异性IgG（ non-specific IgG ）。本小鼠IgG琼脂糖凝胶可以排除IgG本身和一些蛋白或其它生物分子的非特异性结合，从而用于降低背景或作为阴性对照。本产品非特异吸附低，非常适合于免疫沉淀前的样本预处理，能够高效地去除非特异性结合，从而显著提升实验的特异性。同时，该琼脂糖凝胶基本不会识别任何抗原。

阿拉丁小鼠IgG琼脂糖凝胶储存在含0.02% ProClin 300的PBS中，凝胶和保护液的体积比为1：1（即50%凝胶悬液，每毫升本产品中共含有0.5ml凝胶沉淀物），我司产品规格为总体积。产品信息见下表：

使用说明

注意： 下面的实验步骤仅供参考，优先推荐使用特异性抗体偶联的琼脂糖凝胶进行完全相同的实验步骤。

1、样品准备

1.1 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡液对样品或细胞培养液稀释，或者用平衡液透析。

1.2 样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

1.3 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择阿拉丁生产的C301898 Western及IP细胞裂解液用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用阿拉丁生产的P0013B RIPA裂解液(强)、P0013C RIPA裂解液(中)或P0013D RIPA裂解液(弱)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH为6-8。

2、缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。 

平衡液：0.01M PBS，pH7.4。

洗杂液：0.01M PBS，0.05% Tween-20，pH7.4。

3、免疫沉淀操作流程

(1) 填料准备：取40 µL的小鼠IgG琼脂糖凝胶(凝胶实际体积20 µL) 混合液加入到1.5mL 离心管中，5000×g离心1min，吸弃上清；

(2) 填料加入0.5mL平衡液，悬浮填料（使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用），5000×g离心1min，吸弃上清。重复一次。

(3) 加入300µL样品裂解液到处理好的填料中，混合均匀，在室温下置于翻转混合仪轻轻翻转离心管，促使样品和填料充分接触并吸附，室温反应3h。5000×g离心1min，吸弃上清。

(4) 洗杂：加入0.5mL的洗杂液，悬浮填料，轻轻混匀，5000×g离心1min，吸弃上清。再重复三次。确保去除非特异性吸附。

(5)变性洗脱：加入100 µL 1×Loading Buffer，95℃加热5min。5000×g离心1min，吸取上清进行SDS-PAGE电泳检测。

注意：实验室常规蛋白上样缓冲液（Loading Buffer）中含有β-巯基乙醇和DTT，可以使填料中抗体重链和轻链断开。含有SDS的样品缓冲液可以使Anti-MBP抗体变性，洗脱后的小鼠IgG琼脂糖凝胶不能重复使用。

保存条件

2-8ºC保存，12个月内有效，切勿-20ºC或更低温度保存。

注意事项

1.      本产品使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。

2.      在免疫沉淀时，建议设置阳性和阴性对照组。

3.      蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。

4.      高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品的非特异性结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液或NP-40裂解液等都完全适用。

5.      为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物。

6.      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7.     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

级别：BioReagent, for IP

储存缓冲液：0.01M PBS and 0.02% ProClin 300，pH 7.2

浓度：50% v/v

储存条件：2-8°C储存,禁止冷冻

运输条件：低温运输,禁止冷冻

稳定性与储存：-20℃保存，一年有效。

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