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实时荧光定量PCR(real-time PCR) Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。由于Real-time qPCR的众多优点,现在已经是生命科学领域的一项重要技术,并成为基因表达差异和文章发表不可或缺的部分。 普瑞华盛real-time qPCR技术服务,根据实验目的,设计实验方案(相对定量或绝对定量;SYBR Green I或Taqman探针方法),用完全按照符合国际标准(MIQE)的real-time qPCR试剂完成实验,提供符合文章发表的客观事实实验报告和原始数据。操作流程:1、客户提供样品及目的基因名称及登录号2、我公司设计并合成引物及Taqman探针(探针法)3、样品的RNA提取及逆转录4、荧光定量PCR检测(3孔重复)5、提供实验报告,包括实验流程,条件,使用仪器及试剂,标准曲线,扩增曲线,溶解曲线及原始Ct值6、相对定量数据分析(ΔΔCt法)服务要求:细胞样品:新鲜或加Trizol后-80℃保存,数量大于5×106个;组织样品:-80℃保存,干冰运输,数量大于50mg;血液:-80℃保存,体积大于300μl;纯化好的总RNA: OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好;总DNA(OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好;反转录好的cDNA:体积大于30μl(反转录的总RNA完整性好,纯度在1.9-2.1之间); 提供待测基因序列或登录号。实验报告部分组成:原始数据标准曲线熔解曲线扩增曲线
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