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EMSA
一、EMSA服务介绍 凝胶迁移或电泳迁移率实验EMSA(Electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白及其相关DNA结合序列相互作用的实验技术,可用于定性及定量分析。该技术目前已广泛用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列相互作用。EMSA实验通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。
EMSA实验原理图
二、EMSA服务内容 1. 生物素标记探针;2. 抽提核蛋白;3. 配置非变性聚丙烯酰胺凝胶;4. 特异性的证明(首次使用的探针序列需证明其是否与目的蛋白特异性结合,确定目的条带的位置);5. 加入生物素标记的探针;6. 做EMSA检测;7. 结果分析,出具实验报告。 三、EMSA服务说明 1.如需EMSA服务,强烈建议不要自行抽提和蛋白及相应的浓度测定。主要因为:1)我们无法确定所用抽提试剂适合之后的实验操作步骤;2)不知道待测的转录因子是否降解活、活性也可能受到影响;3)由于各种原因无法确定抽提物中是否含有待测的转录因子。2.本市样品交接传递请联系相应的客服专员,本公司会负责样品的交接。外地用户的样品交接使用我公司的建议的样品传递方式进行交接。3.具体的因合同及待测样本量变化而变化,因此请与客服专员联系。 四、EMSA服务质量保证 1. 权威完整的实验报告;2. 真实的原始实验数据;3. 详细的实验步骤。
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