人抗X因子酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
0.1 U/ml -4 U/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗X因子活性。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗X因子水平。用纯化的人X因子抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被抗原的微孔中依次加入抗X因子,再与HRP标记的X因子抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zei终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗X因子呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗X因子浓度。
试剂盒组成
1
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30倍浓缩洗涤液
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20ml×1瓶
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7
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终止液
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6ml×1瓶
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2
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酶标试剂
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6ml×1瓶
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8
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标准品(80 IU/ml)
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0.5ml×1瓶
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3
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酶标包被板
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12孔×8条
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9
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标准品稀释液
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1.5ml×1瓶
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4
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样品稀释液
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6ml×1瓶
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10
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说明书
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1份
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5
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显色剂A液
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6ml×1瓶
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11
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封板膜
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2张
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6
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显色剂B液
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6ml×1/瓶
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12
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密封袋
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1个
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标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
4 IU/ml
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5号标准品
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150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
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2 IU/ml
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4号标准品
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150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
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1 IU/ml
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3号标准品
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150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
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0.5 IU/ml
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2号标准品
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150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
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0.25 IU/ml
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1号标准品
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150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
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2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zei终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3
人抗X因子酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书,
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