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Sequenom MassARRAY Genotype 质谱是带电原子、分子或分子碎片按分子量(质荷比)的大小顺序排列的图谱。质谱仪可通过对物质的分子量(质荷比)进行检测,达到区分、鉴别物质的目的。SNP位点两个等位基因之间存在分子量差异,通过分型实验将差异放大,然后以质谱仪进行检测即可达到SNP分型的目的。带电物质无电场的真空管(Drift region)中的飞行速度与分子量负相关,分子量越小,飞行速度越快,到达检测器(Detector)的时间越早,反之亦然。 图1:飞行时间质谱检测物质分子量的原理 实验原理: MassEXTEND单碱基延伸反应,紧挨SNP位点设计一段探针,在反应体系中以ddNTP替代dNTP,使探针仅在SNP位点处延伸一个碱基即终止。根据SNP位点的不同,探针将结合不同的ddNTP,从而具有不同的分子量,质谱仪即可检测出这种分子量差异,从而实现SNP分型的目的。 图2:飞行时间质谱法对SNP进行分型的原理示意图 技术优势: (1)质谱仪检测的是分子zei本质的特征之一——分子量,不涉及荧光标记、凝胶电泳等,就能检测一个碱基的差异,准确性高,机器本身出错的概率非常低; (2)质谱仪的灵敏度非常高,检测窗口内,任何pmol级别的物质都能被检测出来; (3)通量高:几秒就能检测完一个反应孔; (4)操作简单,仪器要求简单,除质谱仪外,都是常规PCR仪器; (5)灵活:每天可以完成几个反应至上万个反应; (6)便宜:引物不带荧光标记,普通长度(3条引物总长80bp左右),此外在一个反应孔内能完成4个或更多的反应,即通常所说的4重反应; (7)兼容性强:质谱仪还能在核酸的其它方向,以及蛋白质组学、微生物鉴定等领域也能应用。 (8)质谱技术是“一管式操作”,即反应体系在生化学实验过程中始终在一个试管内反应,没有多次转移,这样就减少被污染的概率。 服务路线: 位点选择(a、客户提供 b、公司技术设计) 引物设计(Sequenom Assay design软件设计,zei终确定检测位点) 样本提供(a、全血或组织 b、DNA样本,浓度10-20ng/ul,体积20ul左右) Sequenom质谱检测 数据分析(关联差异分析、单倍体型分析等) 实验周期在2-3周以内即可全部完成。 联系方式: 北京信科奥达科技有限公司 北京海淀区清华东路东王庄39号院 电话******BR>传真******BR>订货热线******7599 E-mail:thinkout@ bjthinkout.com.cn 网址:www.bjthinkout.com
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