MALDI-TOF应用 | 奶粉中的阪崎克罗诺杆菌鉴定

阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）原为阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii），隶属于肠杆菌科，是革兰氏阴性无芽孢杆菌，产黄色色素。1980年日本微生物学家Riichi Sakazakii首先发现这一菌种，将其由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。2008年，Iverson将其重新划分成新的克罗诺杆菌属，并以希腊神话中吃掉自己孩子的克罗诺斯命名，代表该病菌对婴幼儿的致病性。

阪崎克罗诺杆菌主要在奶粉（乳）制品中被发现，已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌，可导致任何年龄段人群的疾病，尤其是对早产儿、免疫系统受损婴儿的威胁最大，严重者可导致败血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎。使用温度不低于70℃的温水来冲调婴儿配方奶粉，足以杀死奶粉中的阪崎肠杆菌。

2005年10月，由中国检验检疫科学研究院和天津出入境检验检疫局（天津海关）牵头完成的《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准实施，解决了中国检测婴幼儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌无标准、无检测方法的问题。

2011年4月开始实施的国家标准《GB 10765-2010 食品安全国家标准 婴儿配方食品》中，要求针对6个月以下的婴儿配方奶粉进行抽样时，每批次奶粉共抽检3个样品，每个样品100克，不得检出阪崎克罗诺杆菌。欧盟委员会和美国FDA相关标准要求是每批次抽检30个样品，每个样品不超过10克，阪崎克罗诺杆菌不得检出。

表1 微生物限量

婴儿配方食品国家标准及对微生物检测的要求

传统的微生物鉴定方法有生化反应，基因测序，免疫学方法等，但耗时都比较长。基于MALDI-TOF的微生物鉴定系统，样品培养好后最快几分钟即可出鉴定结果，比传统方法更快捷，日常使用试剂耗材成本更低，通量更高。

岛津MALDI-TOF iD^Plus微生物快速鉴定系统，其工作流程主要由微生物样品培养制备、质谱数据采集和SARAMIS数据库鉴定三个阶段组成。阪崎克罗诺杆菌培养后，挑取培养基上的单菌落直接涂布于样品靶板上（或进行简单前处理），自然晾干，点上1 μL CHCA基质溶液。在室温下自然晾干，使基质和分析物分子形成共结晶。使用MALDI-TOF iD^Plus Confidence进行质谱检测。将样品质谱图与SARAMIS数据库中的超级谱图进行比对来进行鉴定。

阪崎克罗诺杆菌质谱图及鉴定结果

天津海关动植物与食品检测中心主要从事进出口食品中的微生物检测，对奶粉中的阪崎克罗诺杆菌检测有丰富的经验。赵宏博士表示岛津MALDI-TOF微生物检测系统与传统生化检测的结果对比，匹配度非常高。MALDI-TOF质谱法已成为工作中的常规检测手段之一，检测方便快捷，日常使用成本低。同时针对某些细菌，质谱法可靠性优于生化检测，比如用户测试过的某一株阴沟肠杆菌，质谱法结果正确，生化检测测试多次都未给出准确结果。

使用岛津MALDI-TOF iD^Plus微生物鉴定系统，结合SARAMIS数据库，可以快捷高效的进行阪崎克罗诺杆菌等致病菌的快速鉴别。SARAMIS数据库除快速进行微生物鉴定外，还可以进行聚类分析，新的参考谱图及超级谱图的创建。用户可自行将本地特异性菌株的质谱图添加到数据库中，后续可作为标准谱图使用，以满足不同用户的多元化需求。

撰稿人：黄成才