动物源性食品中诺氟沙星的检测

关键词：Sepline-S4全自动固相萃取系统；动物源性食品；诺氟沙星；GB/T 21312-2007

1.仪器设备

◇Sepline-S4全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

◇ MV5多通道平行浓缩系统（莱伯泰科公司）；

◇ LC600 二元高压梯度高效液相色谱：配有荧光检测器（莱伯泰科公司）；

◇ 固相萃取柱（HLB  200mg/6mL）

1.2 试剂

◇甲醇，乙酸乙酯，乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；

◇ 磷酸氢二钠，柠檬酸，磷酸，三乙胺，乙二胺四乙酸钠（EDTA），氨水（分析纯）；

◇ 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取28.4g磷酸氢二钠，用水溶解，定容至1000mL；

◇ 0.1mol/L柠檬酸溶液：称取21.0g柠檬酸，用水溶解，定容至1000mL；

◇ Mcllvaine缓冲溶液：将1000mL 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液与625mL  0.1mol/L柠檬酸溶液混合；

◇ EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.5g EDTA放入1625mL Mcllvaine缓冲溶液中，超声振摇使其溶解；

◇ 5%甲醇水（体积分数）；

◇ 洗脱液：5%氨水甲醇（体积分数）；

◇ 流动相：0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）：乙腈=88:12（体积比）；

◇ 诺氟沙星标准储备液：100ug/mL，甲醇；

◇ 诺氟沙星标准工作液：取100μL的标准储备液于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为1μg/mL的标准工作液。

① 样品预处理

称取样品5.0g鸡肉，置于50mL离心管中，加入10mL EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，均质1min，超声提取10min，12000r/min离心5min，提取两次，合并上清液。上清液过0.45μm膜后再离心10min（12000r/min），取上清液冷藏静置2h后，过0.22μm膜待处理。

② 样品加标

取① 萃取液5mL，加入25μL的1μg/mL诺氟沙星标准工作液，样品的加标浓度为20 ng/g。

③ SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行Sepline-S4方法编辑，加载并运行方法，Sepline-S4完成 ② 中加标样品的SPE萃取。

        样品收集到收集瓶中，在50℃，5psi条件下进行氮吹浓缩，当收集液浓缩到近干时，加入流动相定容至1mL，漩涡混匀，0.22μm滤膜过滤，待检测。

图1诺氟沙星固相萃取方法

④ 高效液相色谱-荧光检测条件

色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；

流动相：0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）：乙腈=88:12；

流速：1.0mL/min；

荧光检测器：激发波长384nm，发射波长450nm；

柱温：35℃；

进样量：20μL；

① 诺氟沙星标样液相色谱图

图2 20ng/mL的诺氟沙星标样液相色谱图

② 空白样品色谱图

图3为空白样品的色谱图，在诺氟沙星的出峰时间处有响应，说明该样品中有诺氟沙星检出。

图3 空白样品色谱图

③ 加标样品色谱图

图4 加标样品色谱图

④ 加标回收率结果

表1为加标回收率结果，6个平行样的回收率为92.4%~99.8%，RSD 为3.2%。

本文使用Sepline -S4全自动固相萃取系统进行鸡肉中诺氟沙星的萃取，经MV5氮吹浓缩后用液相荧光检测器进行检测，方法的加标回收率为92.4%~99.8%，RSD 为3.2%。通过Sepline -S4全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合鸡肉中诺氟沙星的检测。检测实际鸡肉中诺氟沙星的含量为2.5 μg/kg。

参考标准

1、GB/T 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱法

2、SN/T 3649-2013 饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法 液相色谱-质谱质谱法