【王老师带你玩转FlowJo®】之比自动补偿更自动的AutoSpill

什么是补偿？

    流式荧光染料都具有自己独特的激发光谱和发射光谱。因为多色实验中多种荧光染料发射光谱重叠（图1红色区域），所以一个接收通道会接收到多个荧光染料发射的荧光。

    补偿就是为纠正此类荧光重叠，流式实验者都会通过手动或自动的方式修正这种光谱重叠（图2）。

荧光补偿方式

手动补偿：在补偿调整窗口，手动加减设定补偿值（图3）。

自动补偿：设定单样管阴阳峰后，软件通过自动计算设定补偿值（图4）。

荧光补偿难点

1. 单样管阳性峰不易确定

阳性信号少和连续性表达标记物难以准确界定阳性峰，主观因素影响大（图5）。

2. 正确补偿值难以确定

3. 多色实验工作量太大不宜考虑周全

颜色较多时很难为每个通道确定最适宜的补偿值（图7）。

 AutoSpill自动荧光补偿 

1. 不用圈取阴阳群（图8）

2. 不用手动画荧光补偿流式图（图9）

3. 不用手动计算，补偿View Matrix即得（图10，图11）

4. 补偿值恰到好处 （图12 绿色-Traditional Compensation，红色-AutoSpill Compensation）

AutoSpill 演示视频在这里👇：

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