最新指南!Restek 液相色谱柱的使用与维护

2024-03-01 11:01:02, Restek 瑞思泰康科技(北京)有限公司上海分公司



2024 年 Restek 最新版液相色谱柱的使用 & 维护方法指南出炉啦!


从出厂报告,硬件信息,LC 柱的安装与使用,柱子的维护、清洗和保存......事无巨细,这份新版指南将为您带来保姆级的攻略,让液相柱的使用更高效、精准、寿命更长!



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色谱柱的出厂报告

为了确保每支液相色谱柱都具有卓越性能、控制柱间差异,Restek 会在出厂前对每支液相色谱柱进行柱效测试并出具测试报告。报告中不仅包含测试条件、色谱图、测试结果、保存溶剂,还包含色谱柱的专有信息:比如序列号和填料的批次号。建议打印并随色谱柱保存此报告,以便后续排查故障时参考。出厂报告查询网址:www.restek.com/documentation


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色谱柱硬件

所有 Restek 液相柱硬件均采用 316 不锈钢制成。粒径为 2.7 μm 的 Raptor 核壳柱和粒径大于 3 μm 的多孔硅胶色谱柱使用孔径为 2 μm 的筛板。其余液相柱均使用 0.5 μm 筛板。


虽然 Restek 液相柱两端接口可与 Valco、Parker、Upchurch、Swagelok 和其他品牌的 10-32 尺寸接头兼容。但安装新色谱柱时,请确保连接管路与新色谱柱匹配,如必要请更换连接件螺母和卡套。


拧紧色谱柱与连接件前,请一定确保连接件与色谱柱两端接头连接正确,否则新色谱柱的性能会受到不良影响(例如:柱效下降、峰形拖尾等)或发生渗漏,甚至会使色谱柱难以拆卸。Restek 液相柱两端均自带 PEEK 堵头,安装前拧下堵头即可。(有关色谱柱安装的完整说明,请参阅液相色谱仪的操作手册)。




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色谱柱安装与使用

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流动相

液相柱出厂报告中标明了保存溶剂(在 www.restek.com/documentation 下载报告)。在使用前,请确保即将使用的流动相与保存溶剂互溶;如果不互溶,请用与保存溶剂和目标流动相均互溶的溶剂进行过渡。如果不确定溶剂是否互溶,可查阅 www.restek.com/solvent-chart  中的溶剂互溶表格,或联系 Restek 技术支持。


使用缓冲盐溶液时需要特别小心,因为大多数色谱柱的出厂保存溶剂含有大于 50% 的有机溶剂,一定用不含盐的流动相做好过渡,避免保存溶剂与缓冲盐溶液接触导致盐类析出堵塞色谱柱。

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流向和流速

色谱柱签中的箭头指示了流向,首先将色谱柱入口端连接到进样器或自动进样器端,出口端用烧杯接好,用流动相(或活化溶剂)冲洗 10-15 分钟。逐渐将流速提升到最佳流速(见表 1)或使用流速。然后停泵,将色谱柱出口端连接到检测器。


由于不同液相色谱仪器之间存在差异,特别是在梯度洗脱模式下,您的结果可能与我们实验室获得的结果不同,Restek 技术服务部可以帮助您优化分离,请记录色谱柱使用中的工作压力,便于沟通时参考。

表 1 : 不同粒径、内径色谱柱流速推荐表

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平衡

使用前,建议用初始流动相平衡 5-10 个柱体积。下文介绍了不同类型色谱柱平衡方法,更多信息,详询 Restek 技术服务。



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反相色谱柱平衡

有关反相色谱柱平衡,详细信息请访问 www.restek.com/reversephaseconditioning

柱体积计算公式

全多孔颗粒:V = 0.68 π r2 L,其中 V = 柱体积(以 mL 为单位),r = 柱半径(以 cm 为单位),L = 柱长度(以 cm 为单位);

Raptor 核壳柱:柱体积 V = 0.50 π r2 L。




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HILIC 色谱柱平衡

有关 HILIC 色谱柱平衡您可点击此处查看详细信息

在安装 HILIC 色谱柱之前,请先用高比例有机相冲洗液相色谱管路 30-60 分钟;

开始使用新的 HILIC 色谱柱或改变流动相组成时,建议用至少 50 倍柱体积的流动相平衡;

开始使用新批次色谱柱前,应至少执行 10 次空白进样的完整洗脱程序;

两次进样之间的平衡时间,视具体分析物而定,因此请务必观察保留时间的重现性,以确定重新平衡所需的时间。




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Raptor EtG/EtS 色谱柱平衡

有关 Raptor EtG / EtS 色谱柱平衡,详细信息请访问 www.restek.com/EtGEtSconditioning

在新色谱柱上全梯度洗脱运行 30 次基质进样,可确保后续样品分析过程中良好的重现性。




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色谱柱维护

请在日常实验中记录系统压力,压力升高提示需要及时维护液相色谱系统:比如清洗色谱柱、更换保护柱或在线过滤器。如果确认压力升高由色谱柱引起,可以反冲色谱柱以便除去入口筛板中堆积的颗粒来降低压力(请注意:1.8 μm或 1.9 μm Force 和 Pinnacle DB 系列色谱柱不能反冲)。

反冲方法

停泵并断开色谱柱连接,将色谱柱出口端连接到进样器端,另一端用烧杯接好(请勿将色谱柱接入检测器),使用与流动相兼容的溶剂冲洗色谱柱,流速推荐色谱柱最佳流速的 1/4 至 1/2。反冲后,将色谱柱正向连接,用流动相重新平衡再使用。如果反冲有效,压力降低,请考虑加保护柱或柱前过滤器进行以后的分析。

如果峰形因疑似污染而变差,建议用高比例水相过渡到高比例有机相的流动相梯度冲洗色谱柱,冲洗后,用流动相重新平衡,并检查柱效是否提高。如果问题仍然存在,请考虑使用保护柱。



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色谱柱冲洗和保存

色谱柱使用完、保存前,请至少用 10-20 倍柱体积的溶剂冲洗色谱柱,以除去缓冲盐、酸或碱。


对于短期保存,用不含缓冲盐、酸或碱的流动相冲洗色谱柱。对于长期保存,反相色谱柱应保存在 50% 水- 50% 有机相(如乙腈或甲醇)中,正相色谱柱应保存在非极性溶剂(例如正己烷)中。如果长期储存溶剂与最近使用的流动相不互溶,则用与两者互溶的溶剂做好过渡。色谱柱存放过程中,拧好堵头,并注明保存溶剂。

点击查阅更多详细信息

如果您想要了解有关液相色谱柱使用与维护的更多详细信息,欢迎点击上方按钮查阅原文档,或联系 Restek 技术服务!



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