液相色谱-串联三重四极杆质谱因其优异的灵敏度、特异性和动态范围被誉为小分子化合物的定量金标准。尤其对于基质复杂的血液样本中存在的异构体、结构类似的内源性化合物的分析检测，液相色谱发挥了重要的分离作用，分离效果将直接影响定量准确性和分析检测的效率。而色谱柱作为液相色谱的灵魂存在，需要我们细心呵护。临床小分子化合物的检测中主要以反向色谱柱分析为主，因此，本文重点以反向色谱柱为例，介绍色谱柱的使用和维护。

图一、类固醇激素项目中的一组异构体分离色谱图

■ 核实收到的色谱柱是否与订购的色谱柱相符；

■ 检查外包装是否完好；

■ 检查产品在运输途中是否受到物理性损坏；

①拧下柱两端接头的密封堵头保管好供备用。

②确保液相色谱系统满足以下条件：

■ 密封、管线和进样器洁净；

■ 用过滤并脱气的流动相冲洗泵和管线，确保没有干燥的管线或气泡；

■ 基线稳定、压力一致。

③按照流向标签（位于色谱柱上）指示的方向将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀或高压泵等出口相连接(注意：此处由于高压不能选用peek管)，色谱柱出口端接收集溶剂的瓶子。选择甲醇或乙腈，流速一般为0.2mL/min冲洗色谱柱5-10分钟。停止流量并擦洗色谱柱的出样口端以移除任何颗粒，然后再连接到检测器或质谱仪。逐渐升高流速至项目运行所需流速，建议以20倍色谱柱体积的甲醇/乙腈进行色谱柱的活化。然后由甲醇/乙腈逐渐过渡到与初始比例一致的甲醇/水（5-10分钟），最终过渡到项目运行所需流动相，以10倍柱体积流动相进行色谱柱的平衡。柱体积的计算可参照下表：

图2. 管路接头的死体积所导致的谱带展宽

各检测项目建议使用配套色谱柱进行样本的分析检测，已保障最佳效果。液质联用系统建议使用质谱级甲醇/乙腈及超纯水（18.2 MΩ.cm）进行色谱柱和系统的冲洗和平衡，流动相需参照试剂盒说明书要求进行使用。另外，需要注意色谱柱温度和流动相pH值应参照色谱柱说明书，避免因参数设置不合理，导致色谱柱寿命减少。色谱柱的使用如有疑问，可咨询应用工程师。

分析样品前先用至少10倍于色谱柱体积的质谱级甲醇或乙腈冲洗流路，按照项目液相梯度方法中的初始流动相比例，使用至少10倍于色谱柱体积的溶剂冲洗流路，同时监测背压，压力稳定后（压力波动1~2 bar以内）即可进样。

建议样本检测结束后运行冲洗程序，可将色谱柱保留在柱温箱内。高比例水相可去除极性大的杂质，高比例的有机相可以去除非极性杂质。

除此之外，各实验室可根据自身管理要求，建立色谱柱使用登记表，记录每次使用前、后的色谱柱压力，使用时间、测试数量、是否存在异常情况等信息，以便对色谱柱进行使用情况的汇总，便于后续维护与管理。