最难搞的膜蛋白表达攻略来了！

2023-11-07 14:59:36, 赛默飞生命科学赛默飞世尔科技生命科学产品

膜蛋白（包括 GPCR 和离子通道）约占人体蛋白质的三分之一，对许多细胞过程至关重要，如离子传输、信号转导和化学反应催化。由于膜蛋白具有多种细胞功能，因此膜蛋白研究在药物发现过程中发挥着重要的作用。大约一半的药物通过与膜蛋白作用来达到治疗效果。

由于在与原生生态环境隔离的情况下，很难保持蛋白质的正确构象，因此表达G蛋白偶联受体 (GPCR) 等膜蛋白非常困难。赛默飞提供可靠的膜蛋白表达方案和专业的技术支持，帮助您以高效可靠的方式表达功能性膜蛋白。

HEK-293 细胞和 CHO 细胞等哺乳动物细胞被广泛用作表达重组蛋白的宿主。特别是 HEK-293 细胞，该细胞是膜蛋白表达值得关注的系统，因为其具有适当折叠和/或靶蛋白最佳生物活性所需的翻译后修饰机制。

通用型Expi293表达系统

Expi293 表达系统设计精巧，配有悬浮 293 细胞、优化的培养基和转染试剂，能够实现原生蛋白折叠和最大限度地提高蛋白产量，从而让您的研究实现应有的生物学意义。

适用于结构生物学的Expi293表达系统

Expi293 结构生物学系列产品，经过严谨设计以实现均匀的糖基化和严格的控制表达。使用三种专用 Expi293F 细胞系（GnTI-、诱导表达和诱导表达 GnTI-）实现快速、高产的蛋白质生产。

Expi293F GnTI细胞系

GnTI（(N-acetylglucosaminyltransferase I）参与了糖基化过程中的核心步骤。通过GnTI敲除细胞系的建立，研究人员可以进一步研究GnTI酶在细胞糖基化过程中的功能和调控机制，深入理解细胞糖基化的重要性，并为相关疾病的治疗策略提供理论基础。赛默飞提供首款悬浮HEK293 GnTI 表达系统，能够实现超高的糖基化一致性（图1），简化X 射线晶体学工作流程。Expi293F GnTI- 细胞系被设计用于依赖于蛋白质糖基化状态的分析技术。

产量比其他产品高出30倍
一致敲除GnTI基因
简化的聚糖模式

和通用型Expi293F细胞相比：

图1：Expi293F细胞和Expi293F GnTI细胞表达的人IgG质谱分析结果。Expi293F GnTI细胞表现出了一致的糖基化，超过98％的聚糖表达为 Man5。

图2. Expi293F GnTI-细胞与Expi293细胞具有相当的蛋白表达水平。相比之下，PEI转染的FreeStyle293培养基的ATCC GnTI-细胞的表达水平比Expi293系统中的Expi293F GnTI-细胞低30倍。

图3. 在不同的表达条件下，GPCR CB2在Expi293（通道1-4）和Expi293 GnTI-（通道5-8）细胞中的表达。

Expi293F诱导细胞系

Expi293 F细胞经稳定转染后表达高水平的 TET 抑制蛋白。在没有诱导的情况下，TET 抑制蛋白与质粒的 TET 操作序列结合，阻止相关蛋白的表达。Expi293F诱导型细胞系允许受控和可调节的蛋白表达，这些蛋白可能受益于较慢的表达动力学，如毒性蛋白和膜蛋白。这些细胞还被设计用于促进需要调节蛋白表达的细胞模型的研究。

比T-Rex诱导细胞的产量高9倍
可调节的蛋白表达

图4. 在pcDNA5.0 / TO载体中完全诱导后，Expi293F Tet诱导型细胞与Expi293F细胞蛋白表达水平相当。相比之下，通过PEI转染的在FreeStyle293培养基中的T-Rex-293细胞的表达水平，比Expi293系统中的Expi293F诱导细胞系低近10倍。

图5. 用pcDN5.0 / TO载体Fc融合蛋白转染细胞，然后以剂量依赖性方式用不同水平的四环素诱导。

Expi293诱导型GnTI细胞系

Expi293F诱导型GnTI细胞系结合了前两株细胞的优势，可以实现聚糖修饰蛋白的可调节表达。这些细胞旨在促进复杂蛋白质的分析，无需在结构生物学工作和其他应用中添加工作流程步骤或牺牲产量。

比现有T-Rex-293细胞产量高8倍
可调节的蛋白表达
简化的聚糖模式

图6. 在pcDNA5.0 / TO载体中完全诱导后，Expi293F诱导型GnTI-细胞与Expi293F细胞具有相当的蛋白表达水平。相比之下，通过PEI转染的，在FreeStyle293培养基中的T-Rex-293细胞的表达水平，比Expi293系统中的Expi293F诱导型GnTI细胞系低8倍。