TaqTalk 25期 | ROX参比染料在实时PCR中的应用

假设我们正在观察反应板上的两个特定孔。将数量完全相同的相同样本移液到每个孔中并进行实时扩增。经过较短时间，达到30次循环。对于每一次循环，仪器都会读取报告基团染料的读数。

由于使用的反应组分相同，所以希望两个读数也相同。

遗憾的是，读数并不相同，因为这两个孔的系统不一致。相对而言，这些测量值也不准确。幸运的是，我们在这两个孔中使用了ROX染料。与报告基团相同，ROX染料也可以进行测量，实际上，ROX染料正在跟踪报告基团。换言之，系统不一致影响ROX的程度与其影响报告基团的程度相同。重要的是，仪器会在每次循环中采集成对的测量值。然后在运行快结束时根据相应的ROX测量值区分报告基团值。

因此，数据的精度就提高了。结果值称为Rn，代表归一化报告基团。关于ROX，还需要提到两个关键点。除去几个例外情况，Applied Biosystems实时PCR预混液在到货时就已经包含优化的ROX量，不需要进行添加。并同时提供不含ROX的预混液供您选择，以灵活适应您的实验需求。

其次，Applied Biosystems实时PCR软件将ROX默认为参比染料。了解这一点至关重要，因为如果您出于某种原因决定使用不含ROX的预混液，您需要将参比染料选择更改为“无”。

否则，软件会尝试将不存在的染料归一化。这是错误的。或者，如果您需要使用其他参比染料进行多重反应，例如Applied Biosystems™ Mustang Purple™染料，可以使用软件选择其他方案。

在实时定量PCR或RT-PCR中对荧光报告基因信号进行标准化

为多通路定量PCR和RT-PCR提供稳定基线

使用现有ROX光谱设置，无需重新校准热循环仪