寡核苷酸小科普

寡核酸药物是由20-60个核苷酸单元组成的单链或双链结构，通过作用于mRNA来调控疾病基因转录翻译，抑制基因表达，主要有反义寡核苷酸（ASOs)，小干扰RNA（siRNA）和微小RNA（miRNA）。目前寡核酸药物大多通过固相亚磷酰胺化学法进行合成。化学合成按照3''-5''的方向进行。

常用的固相载体为可控微孔玻璃珠（CPG），CPG通过linker与初始核苷酸核糖的3''-OH共价结合，而核糖的2''-OH用诸如叔丁基二甲基硅基(TBDMS)的保护试剂进行保护，5''-OH则用双甲氧基三苯甲基（DMT）保护。此外，由于腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶存在伯氨基团，也需要用酰基试剂（例如苯甲酰基）进行保护。

固相合成每个循环主要包括四个步骤：去保护、偶联、氧化和加帽。合成中产生的杂质（包括最后的脱保护）有以下几种类型：

截短的序列（shortmersequences）N-X，如N-1，N-2；

更长的序列（longmersequences）N+X，如N+G，N+A；

硫代磷酸酯键（PS）产生的非对映异构体和氧化产生PO杂质；

胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶脱氨基引起的杂质；

其他杂质，如碱基脱嘌呤杂质、2''-5''连接异构杂质、序列异构体等；

目前寡核苷酸质量分析方法主要有HPLC、LC-MS、ELISA、RT-qPCR、CGE等，下图展示了文献中对单链、双链和偶联后的寡核苷酸活性药物成分（API）的检测项目和分析方法。

单链

双链

偶联

Waters UPLC 液相色谱

Agilent 7890B GC

WATERS XEVO TQD LC-MS/MS