特色技术 | LC-SFC多维色谱非手性手性同时分析——元胡止痛片中延胡索乙素对映异构体快速拆分

2023-07-22 19:15:13, 创新中心岛津企业管理（中国）有限公司/岛津（香港）有限公司

针对复杂样品的快速自动化分析，通常的一维色谱系统已经无法满足检测的需求，而基于阀切换技术的多维色谱系统正在发挥更大作用。尤其是组合了超临界流体色谱（SFC）的多维色谱系统，由于超临界流体分离技术特殊的选择性，高效的分离能力，以及节能环保等特点，正在受到越来越多的关注。本文使用高压二位六通阀和高压六位七通阀构建了反相液相色谱和超临界流体色谱联用的多维色谱系统，并搭载了可在第一维和第二维自由切换的质谱检测器或光学检测器。使用该系统，开发了元胡止痛片中的延胡索乙素对映异构体非手性手性分离方法，不仅节省分析时间，而且提高了手性化合物分析的自动化程度。

实验部分

使用液相色谱和超临界流体色谱构建多维系统LC-SFC，并搭载质谱检测器或光学检测器，可对含对映异构体的复杂样品进行非手性手性分离。针对含有复杂组分的元胡止痛片，第一维的反相色谱可将延胡索乙素及其对映异构体与样品中其他杂质分离，进一步，通过阀切换技术，将含对映异构体杂质的混合物导入第二维的超临界流体色谱，通过柱筛选系统，进行延胡索乙素的手性拆分。连接于高压二位六通阀的质谱检测器，可在第一维和第二维之间进行自由切换，同时监控反相LC和SFC系统。

1.1 仪器

本实验使用了岛津公司的超高效液相色谱仪Nexera LC-40、超临界流体色谱仪Nexera UC和质谱仪LCMS-8050构建了多维色谱LC-SFC质谱联用系统（见图1图2），并进行方法开发。

图1 LC-SFC-MS设备图

图2 LC-SFC-MS系统构成图

1.2 分析条件

液相条件：

第一维：

反相分离柱：Shim-pack GIST C18 2.0 x 100 mm, 2 µm

柱温：40°C

第二维：

SFC手性柱：Opti-Chiral C1-5 4.6 x 150 mm, 5 µm

柱温：40°C

质谱条件：

离子源：ESI (+)		DL管温度：250℃
接口电压：4.0 kV		接口温度：300℃
雾化气：氮气 3 L/min		加热模块温度：400℃
加热气：空气 10 L/min		扫描模式：多反应监测
干燥气：氮气 10 L/min		MRM参数：见表3

表3 MRM参数

结果与讨论

2.1 延胡索乙素对照品（四氢巴马汀）分析

使用LC-SFC多维色谱系统对L-四氢巴马汀（L-THP）和D-四氢巴马汀（D-THP）对照品混合溶液进行分析。在第一维梯度条件下，L-THP和D-THP混合物在4.9min溶出反相柱。进一步，通过阀的切换，将L-THP和D-THP混合物导入第二维SFC中，通过手性柱筛选系统，最终使用Opti-Chiral C1手性柱在5min中内实现手性拆分（见图3）。

图3 LC-SFC多维色谱系统分析L-THP和D-THP对照品混合溶液色谱图

2.2 元胡止痛片分析

使用LC-SFC多维色谱系统对元胡止痛片甲醇提取液进行分析，MS检测器在7min从第一维切换至第二维。从图4可以看出，在7min前，L-THP和D-THP混合物与元胡止痛片提取液中的其他同分异构体实现分离。进一步，将4.9min出峰的L-THP和D-THP混合物通过高压切换阀导入第二维的SFC手性分离系统，对映异构体在5min内得到快速分离。