2023-06-15 14:14:15, 基泰生物 上海基泰生物科技有限公司
MS缓冲液
问:LC/MS的流动相中能使用什么添加剂呢?
答:由于最近几年LC/MS用的越来越多,以前的缓冲盐,如磷酸盐就不那么受宠了。更多的是使用易挥发的缓冲盐。磷酸盐不能挥发,而且用久了还会堵塞LC/MS的接口,需要花费不少时间来清理。有些新型号的可以使用10mM的磷酸盐缓冲液,但是也需要定期清理。
所以,用于MS检测器的缓冲盐一定是可挥发的。最简单的添加剂是简单的酸类,如甲酸和乙酸。常用的浓度是0.1%-1%。这能够提供酸性化境,足以使碱性样品离子化。大部分时候,这个条件足够控制酸性和碱性样品的保留。
但是也有例外,这个方法作用也是有限的。一个就是强酸性的环境会抑制酸性样品的离子化。最好的方法是将pH稍微调高点。使用乙酸铵和甲酸铵就可以,而且控制pH对控制保留非常重要。甲酸的pKa是3.75,乙酸的pKa是4.75。这是两类盐的最佳pH。常用的浓度是20mM或更低,有到5mM的。浓度是如此的低,所以最好是在他们的pKa附近使用。一个通则是经常在pKa+/-1范围内使用。
另一个的难点是母液干扰物对样品离子化的抑制,这可以通过正确选择pH来避免。在分析血浆样品时经常碰到这类问题。但是,在中性条件下,大多数母液干扰物是离子化的或是可离子化的,目标样品也是离子化的。因此样品没有分开的时候可以通过调节pH来改善。
有时候也会使用碱性pH的流动相。原因是为了避免离子抑制,或者是为了改善分析的敏感性。酸性物质在碱性pH中的MS响应是最佳的。另外,即使是碱性物质在碱性条件下其响应也是相当好的。在弱碱性流动相中通常是用碳酸氢铵,它的pKa是9.2和10.2。因此,它的使用范围是比较广的,但是最好还是在pH10左右。碳酸氢铵完全适用MS,加热时,碳酸氢铵分解成了氨,水和二氧化碳,都是可挥发的。
总结一下,酸性pH从pH3-pH5.5,碱性pH从pH8.5-pH10我们都有缓冲盐可用。
问:乙酸铵怎么样?我看到过有在中性条件下用乙酸铵的。
答:是的,我也见过。但我们要知道,这时候它根本就不是缓冲液。在pH7时,乙酸铵一点缓冲能力都没有。只能把它当成添加盐。它可能对MS离子化过程有帮助,但是对分析的作用很小。对于中性pH,最好是用碳酸氢铵作为缓冲盐,然后用甲酸调pH。实际的缓冲是有碳酸根来提供的。高浓度时,碳酸会变成二氧化碳和水,但是在LC/MS中浓度很低,是有缓冲能力的,不会有气泡产生。
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