ZIC-HILIC分离无紫外吸收极性化合物:完美匹配通用型检测器

2023-04-23 09:25:38 默克生命科学


近年来,极性化合物分离分析的需求越来越多,比如合成起始原料的分析、单糖、氨基酸,阴阳离子等,给分析人员带来的挑战也越来越大。用于极性化合物分离的HILIC亲水分离模式,也越来越多的被分析人员所熟知。简单来说,HILIC固定相是裸硅胶或硅胶键合亲水性基团,它能结合流动相中的水相形成“富水层”,亲水的极性化合物进入水层,并和键合相发生不同种类的相互作用(亲水分配、氢键作用、静电作用、偶极作等),从而实现保留和分离。


今天为大家介绍默克用于分离强极性化合物的Sequant ZIC-HILIC系列色谱柱,ZIC-HILIC是最早使用两性离子作为键合相的色谱柱,包括磺基甜菜碱和磷酸胆碱两种固定相,表面分别包含1:1的负电荷和正电荷基团,净电荷为0。这两种键合相可以在HILIC模式下形成较厚的“富水层”,用于保留极性和亲水化合物。

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极性化合物中,有一些化合物是无紫外吸收或弱紫外吸收的,无法使用常规紫外检测器分析,解决这类问题,早期只有示差折光RID检测器可以选择,由于RID只能使用等度条件,较多用于糖、寡糖和糖醇的分离,但仍保留了一些经典应用。

这里给大家分享的一个RID检测器的经典应用:使用ZIC-HILIC两性离子键合相色谱柱分离山梨醇和甘露醇,两个化合物的LogP值都是-3.1,属于强极性化合物。

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随后,ELSD、CAD、质谱检测器的出现,可以使用梯度洗脱,更好地解决了弱紫外吸收或无紫外吸收化合物的响应问题,并使得HILIC色谱柱有了更多用武之地。这里给大家分享的应用是使用ZIC-HILIC同时分离阴阳离子。

在一些成盐药物中,ZIC-HILIC色谱柱搭配通用型检测器,可以替代离子色谱分析酸根或阳离子。

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一个重要提示:

大家在使用通用型检测器时,尤其需要注意色谱柱的选择,有一些“柱流失”大的色谱柱会引起噪音水平升高,检测器灵敏度下降,如果是质谱检测器还会对离子源产生污染。那么,如何知道柱流失的大小呢? 

简单来说,在一定的流动相条件下,采集并记录仪器接入色谱柱之前的背景值,记录一段时间后,接入色谱柱,采集并记录仪器的背景值,通过对比接入色谱柱前后背景值的大小,来判断“柱流失”的大小,从而选择柱流失小的色谱柱继续使用。

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上图是对比不同厂家同规格HILIC模式色谱柱“柱流失”大小的结果,可见默克Purospher STAR系列和ZIC-HILIC系列,都在质谱检测器上表现出较低的柱流失,可以用于LCMS的应用或方法开发。

对于HILIC模式下极性化合物的分离,除了ZIC-HILIC,我们还可以提供更多亲水模式的色谱柱:

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更多关于极性化合物分析方法和HILIC模式色谱柱应用的介绍,可以点击下面讲座链接

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如果大家对文中介绍的ZIC-HILIC系列或其他色谱柱感兴趣,也可以长按识别二维码申请试用


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