水产品中硝呋索尔、硝基呋喃代谢物残留量测定的解决方案（一）——SN/T 4520-2016

基质样品：鱼、虾

水解和衍生化：

称取约2.00 g均匀试样（精确到0.01g）于50 mL塑料离心管中，加入0.1 mL DNSAH 内标工作液（0.1 µg/mL）、0.05 mL4种硝基呋喃类代谢物内标工作液（0.1  µg/mL），再依次加入10 mL水，0.5 mL 1 mol/L 盐酸溶液和500 μL 0.05mol/L 2-硝基苯甲醛溶液，涡旋混匀后置于37℃恒温振荡器中避光反应16 h。

提取和净化：

衍生后试样冷却至室温，加5 mL 0.1mol/L磷酸氢二钠溶液，用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.0~7.5后，再加2.0g中性氧化铝（货号SBEQ-CA1801），摇匀1 min，在4℃，10 000 r/min离心10 min，上层清液转移至装有16 mL乙酸乙酯的50mL塑料离心管（铝箔纸避光）中，多管漩涡混合仪漩涡10min后，在4℃条件下，10 000 r/ min离心5 min，收集乙酸乙酯层，残留物用10 mL乙酸乙酯再提取一次，合并两次乙酸乙酯提取液。

提取液在40°C下氮吹干，残渣用1 mL定容液（2mmol/L乙酸铵溶液：乙腈=8：2）溶解，复溶后溶液转移至15mL离心管，再用2 mL乙腈饱和的正己烷液液萃取净化去脂。除去上层溶液后于4℃，13 000 r/min下离心5 min，使用玻璃巴斯德吸管小心吸取下层溶液过0.22 μm PTFE滤膜，待测。

① 加标水平 0.5 μg/kg（对应上机溶液浓度 1 ng/mL）：称取样品后，分别加入0.1 mL 0.01 μg/mL DNSAH标准工作液Ⅱ和0.01 μg/mL 4种硝基呋喃类代谢物标准工作液Ⅱ，后续操作同上；鱼肉基质和虾肉基质各2个平行样；

② 加标水平 1.0 μg/kg（对应上机溶液浓度 2 ng/mL）：称取样品后，分别加入0.2 mL 0.01 μg/mL DNSAH标准工作液Ⅱ和0.01 μg/mL 4种硝基呋喃类代谢物标准工作液Ⅱ，后续操作同上；鱼肉基质和虾肉基质各2个平行样；

③ 加标水平 5 μg/kg（对应上机溶液浓度 10 ng/mL）：称取样品后，分别加入0.1 mL 0.1 μg/mL DNSAH标准工作液Ⅰ和0.1 μg/mL 4种硝基呋喃类代谢物标准工作液Ⅰ，后续操作同上；鱼肉基质和虾肉基质各2个平行样。

表3-2 硝呋索尔及其内标代谢物特征离子参考质谱条件

a）离子源喷雾电压（IS）：4500 V；

b）雾化温度（TEM）：550℃；

c）气帘气压力（CUR）：30 psi；

d）雾化气压力（GAS1）：60psi；

e）加热辅助气（GAS2）：65psi；

f）碰撞气流速比（CAD）：8；

g）其他参数参见表3-3。

表3-3 硝基呋喃类代谢物特征离子参考质谱条件

图4-1 混合标准溶液谱图

（目标物及同位素内标浓度10ng/mL）

图4-2 鱼肉基质样品谱图

图4-4 虾肉基质样品谱图

图4-5 虾肉加标样品谱图（加标水平10ng/mL）

图4-6 混合标准溶液谱图

（目标物浓度10ng/mL及同位素内标）

图4-7 鱼肉基质样品谱图

图4-8 鱼肉基质加标样品谱图（加标水平10ng/mL）

图4-9 虾肉基质样品谱图

图4-10 虾肉基质加标样品谱图（加标水平10ng/mL）

表5-3  虾肉基质加标回收率数据

优化后的方法，硝呋索尔及4种硝基呋喃代谢物标准曲线线性方程R2 > 0.995，线性良好。鱼肉、虾肉基质3个加标水平加标回收率在80%-120%之间，加标回收率良好。能够满足实验要求。