谷物和食品中总淀粉测定方法对比 ——试剂盒方法简介及注意事项

淀粉是由葡萄糖分子聚合而成的高分子碳水化合物，不仅是人类主要的能量来源，在食品、化工、生物医药等行业也有着广泛的应用。测定淀粉含量的方法分为直接测定法和间接测定法。

近红外法、旋光法等，如《GB/T 25219-2010 粮油检验 玉米淀粉含量测定 近红外法》、《GB/T 20378-2006 原淀粉 淀粉含量的测定 旋光法》等；

优点：测定过程简单、效率较高；

缺点：准确度较低、仪器要求较高。

水解-滴定法、比色法、试剂盒法等，如《GB 5009.9-2016 食品安全国家标准 食品中淀粉的测定》，《AOAC 966.11》等

优点：准确度高；

缺点：所需试剂种类较多、成本高；其中，试剂盒法采用集成式试剂，较大程度简化了方法的复杂程度，近来也被广泛应用。见下：

样品经脱脂等步骤后加入耐热α-淀粉酶，将淀粉水解为可溶性支链和无支链的麦芽糊精。淀粉葡萄糖苷酶将麦芽糊精定量水解成D-葡萄糖，然后葡萄糖氧化酶将D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸盐并释放一摩尔的H₂O₂，再用过氧化物酶催化H₂O₂，生成的醌亚胺染料含量用紫外光度计进行测定。

1、碾磨谷物、植物或食品以通过 0.5 mm筛网，备用；

2、准确称量 100mg左右样品，放入玻璃培养管（带盖）中。记录准确重量，轻敲试管使样品到管子的底部；

3、加入0.2mL乙醇溶液（80% v/v），充分浸润样品，使用涡旋混合 5 s；

4、立即向培养管中加入 3 mL 耐热 稀释后α-Amylase 溶液 [bottle 1用（MOPS缓冲液（50mM，pH7.0）加二水合氯化钙 (5 mM)溶液）稀释30倍] ；

5、拧紧盖子，涡旋管子 3 秒，然后将管子转移到微沸水浴中。每2 min上下震摇管子，约8min后，从微沸水浴中取出试管置于 50°C 的水浴中，使其平衡至50℃约 2 min；

6、从50℃水浴中拿出培养管，向其加入4mL[醋酸钠缓冲液（200 mM，pH 4.5）加二水合氯化钙 (5 mM)]，再加入 0.1 mL Amyloglucosidase [bottle 2]， 涡旋混摇匀后，将培养管在 50°C 下孵育 30 分钟；

7、从水浴中取出管子并让它们冷却至室温，倒转管几次确保盖子内侧的冷凝水与管内液体混合；

8、将培养管中液体借助漏斗全部转移至100mL棕色容量瓶中，并用蒸馏水多次清洗培养管一并转移至容量瓶中，并用蒸馏水定容，摇匀；

9、取定容摇匀后液体1mL至微量离心管中10000r离心5min，备用；

10、取离心好的溶液0.1mL至玻璃培养管（带盖）中，一式两份。

11、分别加入 3.0 mL 的 GOPOD 试剂并将溶液孵育在 50°C 保持 20 min，冷却后，上下摇匀，1h内于波长 510 nm 测试溶液吸光度；

同时孵育：

D-Glucose Standard（bottle 5 ，试剂盒提供）：取0.1 mL D-Glucose Standard (1.0 mg/mL) + 3.0 mL GOPOD 试剂，一式四份；

试剂空白：0.1 mL 蒸馏水 + 3.0 mL GOPOD 试剂，一式两份；

12、测定时，光度计需先在试剂空白溶液下进行调零，然后再测试样品。

其中：△A为样品溶液扣除试剂空白后的吸光度值;

F 为因子，100除以（4份 D-Glucose Standard 孵育后所对应的吸光度值的平均值）;

EV 为定容体积，第8步所对应的定容体积100，mL;

D 为第8步定容后，还要继续稀释的倍数（对于高淀粉含量样品而言，见注意事项6），若未继续进行稀释，则D为1;

w 为样品称样量，mg;

试剂盒方法测定总淀粉含量与其他方法并无显著性差异，因其酶解的唯一性使结果更加准确可靠，但试剂盒的使用有以下几点注意事项：

1、试剂盒中GOPOD溶液需避光保存，4℃下3个月或-10℃下12个月。若进行冷冻保存，需分装在小规格棕色试剂瓶中，用1取1，避免反复冻融；此溶液新配置时为浅黄色，吸光度对照蒸馏水读数时应小于 0.1，用该溶液孵育后的标准溶液F值应符合85-115之间；

2、因试剂盒法的取样量较小，若样品不足以具有代表性导致的实验结果偏离，可适当增加样品取样量，每增加100mg样品量，再加入α-Amylase 溶液后相应的微沸水浴孵育时间需增加约10min；但最大样品称样量不要超过500mg，500mg样品量所对应的微沸水浴孵育时间约需50min。

3、对于难分散样品，可适当再增加0.1-0.2 mL乙醇溶液（80% v/v），以确保样品分散均匀；

4、水浴微沸即可，培养管中样品液体无需沸腾，刚放置进水浴的培养管会使水浴瞬时降温，因此孵育时间可相应延后2min左右；

淀粉含量测定的方法多种多样以及各种化合物的检测方法均不一，每种方法各有缺点和实用性，在实际应用中，要根据样品来源、结果准确度要求、成本、操作的难易程度等多种因素来选择测定方法，才能便于实验开展，并提高数据准确性和可信度。