2022-07-30 07:59:48, Lil Bi 上海欧易生物医学科技有限公司
你已选中了添加链接的内容
什么是磁珠?
磁珠的发明构想最初来自于挪威科技大学的化学家John Ugelstad,经过不断改造与完善,到目前已发展到纳米级别。磁珠的基础结构一般为三层,包括内层基质、中间层磁性物质(四氧化三铁)以及最外层官能基团修饰的高分子材料,因官能基团的不同,磁珠具有了不同的功能与应用。
图片来源 头豹研究院
生物磁珠是指具有细小粒径的超顺磁微球,一般具有超强的顺磁性。
1、在磁场中能够迅速聚集,离开磁场后又能够有助于磁分离地均匀分散。
2、具有合适的且差别较小的粒径,保证了足够强的磁响应性又不会沉降。
3、具有丰富的表面活性基团,以便可以和生化物质偶联,并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分离。
磁珠法核酸提取流程图
保存及使用注意事项
目前我们在文库构建中常用磁珠来进行多余片段去除(链霉亲和素磁珠)、片段分选、文库纯化,也常用来进行DNA纯化,以去除杂质,降低杂质对构建文库的影响。磁珠保存及使用过程中有一些关键因素会影响回收效率,下面我们一起来看一下。
►
磁珠的保存
拿到磁珠后首先看下保存条件,我们目前使用的磁珠一般为4℃保存,过低的温度(如-20℃)会破坏磁珠表面修饰,影响磁珠抓取效率,长时间常温放置也会影响磁珠的回收性能,因此磁珠用完后请及时放回4℃。一些磁珠需要避光保存,也请注意。
►
使用前提前拿出平衡至室温
某些磁珠buffer为PEG,PEG分离效果易受pH、温度等影响,温度低PEG不易与水相完全互溶,所以磁珠使用前要平衡至室温。
►
使用前充分混匀
磁珠使用前务必充分混匀,否则影响磁珠抓取效率。部分磁珠容易沉降,分磁珠过程中要多注意磁珠状态,沉降后及时进行混匀,避免因磁珠过少,导致片段抓取不完全,影响下游实验。
►
磁珠比例
成品磁珠请按照说明书使用,特殊情况可咨询试剂公司后自行测试,自己配制的磁珠第一次使用前需使用Marker进行测试,确定最适比例。某些实验如片段分选步骤对磁珠比例要求比较严格,因此多样品时最好使用排枪分磁珠,正式分前先吹吸磁珠对枪头进行润洗,吸取磁珠后观察页面是否平齐,润洗并页面平齐后再分到所需的管子中。如中间需更换枪头,请注意枪头插取方式及力度与上次基本一致。
►
室温孵育
样本与磁珠混合后一定要按照说明进行孵育,此步至关重要。
►
上清去除
有buffer存在的磁珠放到磁力架上去上清时,结合并不牢固,因此此时去上清允许底部有残留,以避免吸到磁珠,影响后续吸附效果。后面加乙醇后磁珠结合较牢固,此时弃上清可将底部吸干。
►
酒精漂洗
一般使用75%~80%乙醇对磁珠进行漂洗,乙醇要现配现用。乙醇浓度越高,体系中水越少,清洗盐离子的能力减弱,但DNA的溶解度小,回收率高;酒精浓度越低,盐离子可以清洗得更干净,但DNA的回收率可能会收到影响。
►
磁珠干燥
磁珠干燥时不可过干,也不可不干。干燥过程中可用10uL枪头来吸取残留液体,尽量避免酒精残留,否则可能会对后续实验造成影响。磁珠过干又可能导致磁珠无法从管壁洗下,或无法吹匀,影响回收效率。磁珠干燥时一般以磁珠刚出现龟裂或管子中无明显液体、磁珠表面无水光为好。
制版人:小久
原创声明:本文由欧易生物(OEBIOTECH)旗下青岛欧易学术团队报道
本文著作权归文章作者所有,欢迎个人转发及分享,未经作者的允许禁止转载。
06-27 福立仪器
好礼来袭 | 分享您身边的特洁安身影06-27
大盘取厚势 落子开新局:战略聚焦开启品牌发展新篇章——访Veralto大中华区总裁秦晓培06-27 星羽
实验操作 | 质粒构建、转化、提取、鉴定、转染、测定(完整版)06-27 小 M
有投必奖 | 大家都用 MCE 产品做了啥? (感染领域)06-27 小 M
科研助攻 | 一文讲清:如何破解 PPI 靶点成药难题06-27 小 M
干货分享 | 谈谈天然产物的改构策略06-27 小 M
玉研口鼻暴露系统 | 精准、可控、高通量的动物肺部疾病造模工具,助力创新药物研发06-26 玉研仪器
高分离 高灵敏 高通量——福立液相LC5190重新定义分离需求06-26 福立仪器
医药行业指南:电位滴定仪选型攻略来啦~06-26
屹路同行 悦启新程06-26 屹尧科技
徕卡精准空间生物学解决方案 第四弹06-26 童昕、南希
【直播预告】第一届大湾区生物电镜制样讲习班06-26 徕卡显微系统
徕卡常规显微镜历经严苛的ISO9022标准测试06-26 徕卡显微系统
Viventis LS2 Live 光片显微镜发布会06-26 徕卡显微系统
前沿应用 | 经皮无创血糖检测中葡萄糖拉曼峰直接观测06-26 鉴知技术
SNEC光伏展圆满落幕 | OTT HydroMet闪耀时刻精彩回顾06-26 OTT HydroMet
激光指向稳定在光刻系统应用中的关键作用,及其优化方案!06-26 圈内人都会关注
推陈出新!通微公司携新品亮相本届CPHI06-26 Unimicro
远离氟污染!开启无氟接触前处理技术新篇章06-26