2022-07-20 15:27:53, Sarah 上海玮驰仪器有限公司
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工欲善其事必先利其器,生物制药从前期药物靶点确认,高通量筛选,药物优化,活性功能分析,工艺开发,直至质量控制都离不开酶标仪这一检测工具。一款优秀的酶标仪,在灵敏度,稳定性,功能多样性几个维度如何平衡和把握呢?
酶标仪最常规的功能包含光吸收,荧光和化学发光,这三种应用能够满足比较基础的检测需求。但它们在原理上有着迥异的差别:光吸收是基于光通过物质时被吸收的定律进行定性和定量分析;荧光是荧光分子中处于激发态的原子核外电子由高能级回到低能级所产生的辐射;化学发光的检测信号是酶促反应过程中释放的光子,不需要激发光。因此,若想获取比较好的检测结果,三种功能模块的检测器需要独立才是,尤其是化学发光,需要独立于荧光之外的超敏感检测模式,放大检测光子信号、减少空间串扰,才能在实验中得到更好的检测窗口。
EnSight这款多模式检测仪最初的设计理念就是模块化的光路设计,不同且独立的检测器满足不同应用需求。采用专用超敏感化学发光检测器以及免光纤的光路,在检测时更靠近检测样品,有效避免相邻样本的交叉干扰,也更易于捕捉微弱信号,有效区分背景干扰和样品信号,相对普通化学发光,灵敏度提升10倍,孔间串扰低0.05%,确保实验结果的可靠和准确。
EnSight超敏化学发光检测光路以及与一般化学发光的比较
2020年,中国食品药品检定研究院(简称中检院)王佑春团队在EmergingMicrobes &Infections上发表了重要论文,本文作者开发了SARS-CoV-2抗病毒检测的PBNA(pseudovirus-based neutralization assays)评价方法。首先作者构建并滴定SARS-CoV-2假病毒;接着对SARS-CoV-2 PBNA体系进行了优化;最终将此PBNA体系可作为疫苗对抑制SARS-CoV-2侵入效果和靶向病毒入侵治疗方案的评价方法。
作者全程借助EnSight和Britelite底物进行化学发光检测:
SARS-CoV-2假病毒构建和滴度检测
SARS-CoV-2中和反应检测方法的建立和验证
基于整个检测系统的高灵敏度和稳定性,该方法作为标准SOP下发各省疾控,同时提供给新冠疫苗和治疗药物开发机构,以评估候选疫苗或药物的疗效。
SARS-CoV-2 PBNA验证和工作流程
除了基础的三功能,要实现更多的检测应用,尤其是药物研发阶段,具有多功能或可扩展性的酶标仪是更好的选择。
EnSight除具有基本功能高精度四光栅(光吸收、荧光)模块和超灵敏独立化学发光检测以外,还可扩展超灵敏度Alpha检测功能以及高灵敏时间分辨荧光&高兼容性TR-FRET。
说起ELISA,可谓是免疫学中的经典实验,但是做过的小伙伴都知道,过程“耗时耗力”,加样,甩板子,洗涤,反复循环,一次实验耗费大半天时间。那么,到底怎样才能实现灵敏度又高,流程又短,省时省力的目标蛋白检测呢?
只需混合无需洗涤的ELISA——Alpha提供解决方案。和ELISA相比,Alpha是为均相检测,操作十分简便。可省去费时费力的清洗步骤,无论是总的实验操作时间,还是试剂准备时间都被大大缩短。
Alpha检测须配置高强度的激光光源,以激发出供体微珠上足量的单体氧分子。EnSight超灵敏HTS Alpha模块在配置激光光源和超灵敏PMT的基础上,又对光源和PMT进行了优化,因此其信噪比更高、检测速度更快,得到低背景、高灵敏度的信号。再者,易于实现自动化分液操作,非常适合高通量筛选。
稀土元素在受到荧光激发时,发生荧光衰减的周期通常是很长,能达到1-2ms,可以满足测量要求,因此而产生了时间分辨荧光分析法,即使用长效荧光标记物,在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法。TRF光信号比普通荧光信号较弱,EnSight采用优化的滤光片及专用二向色镜光路,以尽量保证激发光强度、光透过率及杂信号干扰,以达到更好的检测灵敏度和信噪比。
酶标仪一般是通过读取光强度值这一单一维度来评估样品信息,但细胞类检测对数据的更高要求,如细胞数量、生长融合度、细胞形态和增殖、凋亡水平、病毒空斑实验等。EnSight十八般武艺,样样精通。
EnSight具有高速高效细胞成像模块,采用先进的sCMOS相机以降低信号背景噪音,激光自动聚焦以快速成像,固态光源(LED)以进行短时照明。可以依次进行多通道检测,一整个384孔板整板生成单色图像只需大约5分钟。相比人工计数和分析,可以显著提高实验通量以及实验结果的准确性和稳定性。
EnSight 多模式检测仪进行成像和空斑计数分析
人工计数和EnSight计数的比较
出色的酶标检测结果,离不开硬件全程保驾护航,同时更需要一个好的军师——分析软件。
EnSight基于工作流程的Kaleido数据采集和分析软件方便易学,其用户界面会引导实验进行,更加轻松自如地设置和运行多技术流程。用户可根据自己的技能水平和熟练程度设置实验方案。预制的方案有助于更快启动实验,非常适合新手和日常应用。利用该软件的任务工具箱,可以将任务结合起来创建自定义方案,因此可以在更广泛的成像应用中快速获取结果。
集美貌与才华与一身,EnSight多功能酶标仪以一种独特的方式将标记技术与微孔板显微成像技术完美整合,为您的研究提供一种真正的正交方法,使您获得前所未有的深入见解。
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