2022-05-13 22:17:00, 徕卡显微系统 徕卡显微系统(上海)贸易有限公司
对于收集到的活细胞3D数据,3D RCAN可以有效避免光漂白,允许我们拍摄长时间的超分辨率3D图像数据。实际应用中,图像分辨率非常好,我们甚至能够在3D图像中长时间观察到线粒体和囊泡的相互作用。3D RCAN的图像去模糊效果也比其他测试方法更好。
我们还使用受激发射损耗(STED)拍摄的实验数据来训练RCAN模型,用以测试RCAN的性能。相比共聚焦的空间分辨率,RCAN在多个固定或活细胞样品中实现了2.5倍的提升,与STED的提升效果类似。值得注意的是,反卷积共聚焦数据无法实现类似的分辨率提升。
研究人员还开发了将RCAN与膨胀显微术(expansion microscopy)相结合以提升iSIM分辨率的方案。在细胞爬片样本,线粒体和微管动力学的4D研究中,这种方法可以实现1.9倍的横向分辨率和3.6倍的轴向分辨率提升。需要注意的是,膨胀显微术不能应用于活体样本成像。
基于这些结果,作者认为,相比现有方法(例如光片显微镜和转盘共聚焦成像设备),3D RCAN与高分辨率、多噪点的共聚焦显微镜或iSIM相结合可以成为3D活细胞成像的精妙方案。作者还在考虑使用这种方法进一步改善其他显微成像模式。
表达EGFP-Tomm20的U20S活细胞图像。高放大倍率视图,原始iSIM、去卷积iSIM和 RCAN预测进行比较。红色剪头表明RCAN可以比iSIM更好地解析线粒体。图片来源:Nature Methods
如何使用3D RCAN模式
在GitHub和我们的网页上可以找到代码、数据以及经过训练的深度学习模式。此外,我们还在Aivia中部署了所有预训练模型,因此每个人都能将其轻松用于自己的数据。Aivia用户还可以添加训练数据,以针对自己的成像/采样工作优化我们的预训练模型。
本项研究刊载于2021年6月出版的《Nature Methods》杂志上。
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