【应用分享】全自动固相萃取-液质法对菠菜中多种农药残留的检测方法

2022-04-18 14:04:04, 食品安全的守护者山东美正生物科技有限公司

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本应用参照GB 23200.113-2018《植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》中固相萃取的前处理方法，采用美正ASPE720全自动固相萃取仪结合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）对菠菜中的71种农药残留进行了测定，经实验结果分析，采用ASPE720全自动固相萃取仪进行GCB/NH2前处理方法，71种农药回收率在70% ~ 120%，符合实验要求。

“

ASPE720

全自动固相萃取仪

“

前处理耗材

仪器、试剂与材料

1、主要仪器设备

PerkinElmer QSight液相色谱串联质谱仪；

ASPE720全自动固相萃取仪。

2、试剂材料

超纯水；乙腈、甲醇为色谱纯；

甲酸、甲苯为分析纯；

71种农药混合标准品：乙腈溶解；

PolyPlusGCB/NH2(500mg/500mg/6 mL),P/N:CSS0014；

前处理方法

1、样品提取

称取10 g试样于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈，用高速匀浆机8000 r/min匀浆2 min，加入5 g ~ 7 g氯化钠剧烈振荡数次，4200 r/min离心5 min，准确吸取10 mL上清液于100mL茄型瓶中，40℃水浴旋转蒸发至1 mL左右，氮气吹至近干，用3 mL乙腈/甲苯（3/1，V/V）洗涤旋蒸瓶转移至固相萃取仪标配的上样管中，再用2 mL乙腈/甲苯（3/1，V/V）洗涤并转移至上样管中，重复2次，混匀，待净化。

2、样品净化

将GCB/NH2小柱放置于全自动固相萃取仪的SPE柱支架上，再将标配收集管放置于收集架上，按照表1的指令设置方法，启动仪器，由仪器自动完成净化步骤。

ASPE720仪器参数

操作指令	试剂	体积/mL	流速 /mL/min
活化	乙腈/甲苯(3/1,V/V)	5	1
常规样品	待净化液	7	1
洗脱	乙腈/甲苯(3/1,V/V)	10	2
洗脱	乙腈/甲苯(3/1,V/V)	10	2

3、后处理

将收集到的所有流出液40℃水浴中旋蒸浓缩至近干，加入1 mL乙腈复溶，过0.22 µm Nylon滤膜即得。

色谱条件

色谱柱：Kinetex F5，2.6 µm，3.0 × 50 mm；

流动相A：2 mM醋酸铵水溶液（含0.1%的甲酸）

流动相B：甲醇；

柱温：35℃；

进样量：5 µL

梯度洗脱见下表。

液相色谱梯度洗脱条件

时间/min	A/%	B/%
0	95	5
0.5	95	5
1	60	40
5	15	85
8	5	95
10	5	95
10.1	95	5
12	95	5

质谱条件

离子源：ESI+；雾化气温度：200℃；电喷雾电压：4800 V；离子源温度：250℃；反吹气温度：80℃；质谱接口温度：250℃；采集方式：多反应监测（MRM）；

离子源：ESI-；雾化气温度：200℃；电喷雾电压：-4500 V；离子源温度：250℃；反吹气温度：80℃；质谱接口温度：250℃；采集方式：多反应监测（MRM）。

离子参数情况见下表。

84种农药质谱参数

物质名称	Q1	Q2	EV/V	CCL2/V	CE/V
甲胺磷	142	94	5	-28	-18
	142	125	11	-24	-18
乐果	230	199	10	-44	-12
	230	125	8	-52	-29
啶虫脒	223	126	21	-48	-25
	223	99	25	-80	-57
抗蚜威	239.2	72	3	-44	-28
	239.2	182	11	-48	-20
克百威	222.1	165	18	-48	-14
	222.1	123.1	4	-56	-28
敌敌畏	221	109	23	-52	-22
	221	127	27	-88	-29
甲萘威	202.1	145	16	-32	-13
	202.1	127	14	-52	-41
甲拌磷亚砜	277	199	7	-60	-13
	277	153	9	-48	-20
倍硫磷亚砜	295	280	30	-76	-23
	295	109	31	-76	-41
粉唑醇	302.1	123	21	-80	-39
	302.1	109	22	-88	-43
甲拌磷砜	293	96.9	22	-76	-53
	293	114.7	23	-60	-37
甲霜灵	280.2	220	6	-64	-17
	280.2	192.3	23	-64	-23
倍硫磷砜	311	124.8	30	-72	-29
	311	278.9	28	-92	-22
多效唑	294	70	25	-56	-25
	294	125	21	-104	-59
甲基对硫磷	264	231.9	4	-56	-22
	264	124.9	9	-72	-23
马拉硫磷	331	127	19	-60	-17
	331	99	18	-60	-39
腐霉利	284	256	29	-72	-23
	284	228	24	-112	-27
氯唑磷	316	164	4	-56	-22
	316	122	3	-80	-35
己唑醇	314.1	70.1	17	-52	-25
	314.1	159	20	-108	-33
腈苯唑	337.1	70	30	-72	-27
	337.1	124.9	34	-92	-35
除虫脲	311	158	12	-48	-18
	311	141.2	10	-88	-53
氟硅唑	316	247.1	26	-88	-23
	316	165	28	-96	-34
丙环唑	342.1	159	30	-100	-39
	344.1	161	30	-76	-35
甲基异硫磷	273	231	0	-60	-14
	273	121.1	2	-60	-34
倍硫磷	279.1	247	5	-64	-17
	279.1	169	9	-68	-23
甲拌磷	261	75	12	-52	-40
	261	47	13	-108	-89
对硫磷	292	236	0	-64	-19
	292	264	17	-60	-13
二嗪磷	305	169	12	-84	-27
	305	153	23	-72	-25
噁唑菌酮	392	331	7	-60	-12
	392	238	11	-80	-25
甲基毒死蜱	322	125.1	3	-60	-29
	324	125.1	5	-72	-27
吡唑醚菌酯	388.1	194	8	-68	-17
	388.1	163	5	-60	-34
伏杀硫磷	368	182	24	-60	-20
	368	322	21	-80	-12
丙溴磷	373	302.9	22	-80	-25
	373	345.2	32	-120	-18
苯醚甲环唑	406.1	251	32	-108	-31
	406.1	337	24	-92	-21
毒死蜱	350	97	4	-60	-34
	350	198	17	-208	-5
联苯菊酯	440.3	181.1	10	-72	-16
	440.3	166.2	5	-96	-72
乙酰甲胺磷	184	143	12	-28	-11
	184	125	11	-44	-18
霜霉威	189	102	10	-40	-24
	189	74	14	-48	-36
杀虫脒	197.1	117	29	-64	-34
	197.1	89	26	-108	-68
涕灭威亚砜	116.1	89	1	-20	-12
	116.1	70	7	-24	-14
异丙威	194	95	18	-40	-18
	194	137	17	-32	-11
莠去津	216.1	174	30	-64	-23
	216.1	104	26	-64	-38
嘧霉胺	200	107	39	-80	-30
	200	183	1	-128	-27
内吸磷	259	89	1	-44	-10
	259	61	8	-72	-63
杀扑磷	303	145	14	-48	-13
	303	85	15	-56	-39
亚胺硫磷	318	160	15	-52	-13
	318	133	13	-92	-64
嘧菌酯	404.1	372	7	-80	-18
	404.1	344.1	17	-124	-32
灭线磷	243	131	20	-52	-25
	243	97	19	-64	-46
烯酰吗啉	388.1	301	3	-92	-27
	388.1	165	6	-128	-41
三唑酮	294	197	25	-64	-20
	294	225	21	-60	-16
三唑醇	296.1	70	11	-56	-46
	296.1	227	4	-56	-17
三唑磷	314	162	4	-64	-23
	314	119.1	24	-68	-50
杀螟硫磷	278	125	17	-72	-27
	278	246	22	-76	-19
异菌脲	330.1	245	1	-64	-19
	330.1	288	17	-72	-15
戊唑醇	308	70	30	-68	-30
	308	125	6	-96	-57
灭幼脲	309	156	2	-56	-20
	309	139	7	-72	-45
水胺硫磷	231	121	26	-60	-25
	231	109	32	-56	-39
治螟磷	323	171.1	0	-60	-19
	323	115	19	-60	-41
咪鲜胺	376.2	308	1	-64	-16
	376.2	266	6	-68	-24
辛硫磷	299.1	77	2	-52	-38
	299.1	129	14	-220	-3
溴虫腈	409.1	58.9	29	-76	-25
	409.1	378.8	29	-80	-22
肟菌酯	409.1	186	11	-80	-22
	409.1	145	10	-104	-75
茚虫威	528	249	21	-92	-21
	528	293	17	-112	-19
唑虫酰胺	384.1	197	20	-112	-34
	384.1	171	14	-96	-30
乙螨唑	360.2	141	30	-80	-39
	360.2	304	14	-92	-23
氰戊菊酯	437	167	19	-64	-23
	437	125	11	-116	-86
唑螨酯	422	366.1	20	-104	-22
	422	135.1	26	-128	-44
氟虫腈	435	330	-1	80	23
	435	250	-22	84	39
氟虫腈砜	451	415	-26	108	21
	451	282	-27	124	36
氟虫腈亚砜	419	262	0	112	39
	419	383	-2	84	17
氟甲腈	387	351	0	84	19
	387	282	-1	128	42

实验结果

菠菜加标回收实验结果（n=4，添加水平0.002mg/kg）

甲胺磷	92.4	9.8
乐果	88	10.3
啶虫脒	79.4	12.3
抗蚜威	90.5	1.2
克百威	89.4	1.7
敌敌畏	84.6	3.7
甲萘威	89.3	2.6
甲拌磷亚砜	91.7	3.3
倍硫磷亚砜	89.3	4.7
粉唑醇	94.3	4.6
甲拌磷砜	96	3.4
甲霜灵	94.4	4.7
倍硫磷砜	95.7	4.9
多效唑	96.7	4.3
甲基对硫磷	104.6	12.9
马拉硫磷	94.4	3.5
腐霉利	91.2	5
氯唑磷	96.9	2.8
己唑醇	101.1	8.1
腈苯唑	93.5	5
除虫脲	95.8	1.8
氟硅唑	95.1	4.6
丙环唑	103.3	15.4
甲基异硫磷	100	3.6
倍硫磷	99.2	5.1
甲拌磷	98.9	3.4
对硫磷	107.3	3.9
二嗪磷	100.2	3.9
噁唑菌酮	100.5	3.4
甲基毒死蜱	113.6	5.7
吡唑醚菌酯	107.3	6.9
伏杀硫磷	99.3	3.9
丙溴磷	97.6	4.2
苯醚甲环唑	93	2.7
毒死蜱	94.4	7.5
联苯菊酯	109.8	5.3
乙酰甲胺磷	99.6	8.1
霜霉威	87.4	20
杀虫脒	78.7	17.4
涕灭威亚砜	85.3	4.6
异丙威	91.5	4.2
莠去津	92.3	6
嘧霉胺	87.7	4
内吸磷	97.2	2
杀扑磷	94.8	4.5
亚胺硫磷	104.5	8
嘧菌酯	97.1	2.2
灭线磷	89.4	1.3
烯酰吗啉	97.2	1.4
三唑酮	99.6	3.6
三唑醇	97.7	6.6
三唑磷	98.3	3.4
杀螟硫磷	84.1	12.6
异菌脲	110.1	13.3
戊唑醇	92.3	2.7
灭幼脲	96.6	4.5
水胺硫磷	101.1	4.1
治螟磷	103.7	2.8
咪鲜胺	106.8	4
辛硫磷	96.9	2.5
溴虫腈	88.9	10.6
肟菌酯	92.7	2.5
茚虫威	101.5	8.2
唑虫酰胺	100.7	9.8
乙螨唑	120	12.3
S-氰戊菊酯	80.2	18.7
唑螨酯	100.8	3.1
氟虫腈	89.5	5.9
氟虫腈砜	89.9	3.1
氟虫腈亚砜	89.2	5.4
氟甲腈	87	3.9

实验谱图

图1. 10 ng/mL 71种农药混合标准工作溶液色谱图

图2. 菠菜基质空白色谱图

图3. 10 ng/mL菠菜基质混合标准工作溶液色谱图

图4. 菠菜基质加标色谱图.png

图4. 0.002 mg/kg菠菜基质加标色谱图

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