解决方案|气相色谱法测定奶粉中反式脂肪酸含量

反式脂肪酸也称反式脂肪，它可分为两类：一类是天然的，存在于牛羊肉和牛羊奶中的反式脂肪；一类是人工制造的，是在动植物油脂加工和烹调过程中产生的。长期、过量食用反式脂肪酸，会严重危害人体健康。“减少含反式脂肪酸食物的摄入”是卫生部一直在积极倡导的健康生活方式。婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸含量较低，但长期食用会干扰婴幼儿必需脂肪酸的利用，并造成中枢神经系统发育障碍，因此需要对食品中反式脂肪酸进行规定、监督、检测其含量。

本文根据国标GB5413.36—2010 《婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定》中提供的方法，利用气相色谱法对奶粉中反式脂肪酸含量进行测定。供相关人员参考。

GC-4100气相色谱仪

实验原理

仪器设备与试剂

GC-4100 气相色谱仪（FID检测器）；

石油醚：沸程 30 ℃～60 ℃;

乙醚：分析纯;

95 %乙醇：分析纯;

正己烷：色谱纯;

氨水：25 %～28 %，分析纯;

氢氧化钾：分析纯;

甲醇：分析纯;

无水硫酸钠：分析纯;

脂肪酸甲酯标准品：反-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t）、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t，12t）。

实验条件

色谱柱：HP-88 100m×0.25mm×0.20μm;

汽化室温度：250℃;

柱箱温度：初时温度120℃三阶程升到230℃.FID检测器温度：300℃;

载气：高纯N_{2 ；}  

分流比：70:1；  

进样量：1μL。

程升条件：

样品处理

称取混合均匀的固体试样约1.5 g（精确到 0.1 mg）于毛氏抽脂瓶中，加入10 mL 45 ℃±2 ℃的水，将试样洗入毛氏抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样完全散开，冷却至室温。

脂肪的提取：向毛氏抽脂瓶中加入3.0 mL 氨水，混匀。置于 60 ℃±2 ℃水浴中 15 min～20 min，冷却至室温。加入 10 mL乙醇和1 滴刚果红溶液，混匀。再加入25mL 乙醚，塞上瓶塞，手动震荡1 min。再加入 25mL 石油醚，震荡 1 min， 4000 转/分钟离心10min，倾出上清液于圆底烧瓶（与旋转蒸发仪配套）中，为第一次提取。在剩余试样液中再加入5 mL 乙醇，25 mL 乙醚，25 mL 石油醚按上述操作步骤进行第二次提取。用离心机离心分层后倾出上清液与第一次的上清液合并。将圆底烧瓶置于旋转蒸发器上，在 60 ℃±2 ℃通入氮气条件下旋转蒸发除去溶剂，保留残渣，即为脂肪。

脂肪酸甲酯的制备：将上述脂肪用正己烷溶解并定容至10.0 mL，取出 3.0 mL 于 10 mL具塞试管中，加入 0.3 mL 氢氧化钾-甲醇溶液。盖紧瓶盖，涡旋振荡器上剧烈振摇 2 min，4000 转/分钟离心 5 min 后将上清液转入气相色谱试样瓶中，此为试样测定液。

标准谱图

图1 标准液的色谱分离谱图

曲线方程：Y = 35223.966102X+0.0000

相关系数：r = 0.9991

图2 反-9-十八碳一烯酸甲酯的校准曲线

曲线方程：Y = 30457.65138 X+0.0000

相关系数：r = 0.9995

图3 反-9，12-十八碳二烯酸甲酯的校准曲线

样品检测

图4 样品色谱分析谱图

精密度实验

在重复性条件下进行两次独立测定，根据测定结果，计算精密度。计算结果如表3所示。