2021-07-16 15:45:03 艾杰尔-飞诺美(Agela & Phenomenex)
检测背景
儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚胺(CA)包括去甲肾上腺素(NA或NE)、肾上腺素(Ad或E)和多巴胺(DA)及它们的衍生物。儿茶酚胺类物质在体内调节基本生理功能,传递生理信号,是正常生理过程中重要的信号介质,同时在病理过程中也出现其含量的相应变化。临床上可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病。血浆里儿茶酚胺水平的变化显示不同的病态情形,因此也被用于多种临床应用检测项目中。本次应用,我们将向您介绍血浆中儿茶酚胺的LC-MS/MS分析方法。
样品制备
固相萃取(SPE)
小柱:Cleanert® PWCX
货号:WC00201-MW
活化:先用 200 μL 甲醇活化,再用 200 μL 50 mM 乙酸铵活化,控制流速 3-5s/滴。
上样:把预处理的样品分两次上样,每次 500 μL,施加正压全部压下,控制流速 3-5s/滴。(500 μL 人血混合液+10 μL 0.1%甲酸乙腈 +10 μL 内标+500 μL 50 mM 醋酸铵溶液,混匀。)
淋洗 1:向每孔加入500 μL乙腈,正压压下,控制流速 3-5s/滴,弃去。
淋洗 2:向每孔加入500 μL水,正压压下,控制流速 3-5s/滴,弃去,然后施加 0.5MPa 压力压 1min。(不同的正压装置压力强度不同,压力的设定会随之改变,唯一不变的是尽可能 的保证柱床中不能有太多水分)
洗脱:向每孔中加入100 μL 2%FA乙腈,正压压下,控制流速3-5s/滴,收集。
氮吹:将收集的洗脱液在室温下氮吹干
复溶:用60 μL流动相复溶,涡旋30s,盖上硅胶垫进样检测
LC-MS/MS条件
色谱柱:儿茶酚胺专用柱 3 µm
规格:2.1 × 100 mm
货号:VSI931002-A
流动相:
A:0.1%甲酸-10mM甲酸铵水;
B:0.1%甲酸-10%水-10mM甲酸铵-90%乙腈
梯度:
流速:0.6mL/min
柱温:40 ℃
进样量:10uL
图1.500pg/ml 多巴胺标准品出峰谱图
图2.1ng/ml 去甲肾上腺素标准品出峰谱图
图3.500pg/ml 肾上腺素标准品出峰谱图
图4.500pg/ml 去甲变肾上腺素标准品出峰谱图
图5.50pg/ml 甲氧酪胺标准品出峰谱图
图6.50pg/ml 变肾上腺素标准品出峰谱图
实验结果
血浆样品加标回收率实验结果(添加水平 pg/mL)
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