2021-03-27 07:07:40, 莱伯泰科 北京莱伯泰科仪器股份有限公司
瘦肉精是指能够促进瘦肉生长的饲料添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”,主要包括盐酸克仑特罗、莱克多胺、沙丁胺醇等β-受体激动剂的药物。猪、羊等摄入“瘦肉精”后能加速成长、提高出肉率,但“瘦肉精”后会在动物组织内形成残留,消费者后直接危害体健康。我国在2002年就已经严禁“瘦肉精”作为兽药和饲料添加剂。2021年央视3.15晚会曝光,河北省青县肉羊养殖户违禁使用“瘦肉精”,导致瘦肉精羊流向多地,严重危害消费者健康。
本实验依据由农业部发布的国家标准《猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法(农业部1025号公告-11-2008)》和农业行业标准《动物尿液中11中β-受体激动剂的检测(农业部1063号公告-3-2008)》,采用莱伯泰科全自动固相萃取仪SPE 1000对尿样进行净化,MultiVap-10平行定量浓缩系统浓缩后用液相色谱质谱检测。该方法能够高效、稳定地达到实验的要求,可以提供领域范围内的良好应用。
1.1仪器设备
SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司):ABSCIEX Triple Quad 4500液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS);MultiVap-10多通道平行浓缩仪(莱伯泰科公司)。
SPE1000 全自动固相萃取仪
MultiVap-10 全自动平行浓缩仪
乙腈(色谱纯);甲酸(色谱纯);异丙醇-乙酸乙酯:(6+4,V/V);5%氨水甲醇溶液:取5mL氨水与95mL甲醇混合; 0.2%甲酸水溶液:取甲酸1mL,加水定容至500mL;含5mM甲酸铵和0.1%甲酸水溶液:称取5mM甲酸铵和1mL甲酸,加水定容至1L;乙酸铵溶液(2 mol/L):称取15.4g乙酸铵,溶解于100mL水中,用适量乙酸调pH至5.2;氢氧化钠溶液(5 mol/L):称取氢氧化钠10g,溶于50mL水中;氯化钠(分析纯);β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶;β-受体激动剂混标工作液:1mg/L,溶剂为甲醇;固相萃取柱(PXC 500mg/6mL)。
2.1尿样样品前处理
2.1.1酶解
准确量取5mL尿样于50mL离心管中,加入0.5 mL 2 mol/L的乙酸铵缓冲液(pH=5.2),加入40μLβ-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,漩涡混匀,37℃避光水浴震荡16 h。
2.1.2 提取
酶解后,将待测样品用10000 rpm离心10 min,取上清液与另一50 mL离心管内,用5 mol/L NaOH调节pH值至9.8,加入10 mL异丙醇-乙酸乙酯,加入约2 g固体氯化钠,漩涡震荡10 min,5000 rpm离心10 min。以10 mL异丙醇-乙酸乙酯再次提取,合并两次上清液于50mL浓缩杯中。
2.1.3浓缩
将浓缩杯置于MultiVap-10中,50℃氮吹至干,然后用5 mL 2 mol/L乙酸铵溶液溶解,待净化。
2.1.4净化
将样品放入SPE 1000全自动固相萃取系统,检查溶剂量和气路密封性完好,并将PXC固相萃取柱放入相应萃取通道。
按照图1所示的方法进行SPE 1000固相萃取方法编辑,并加载方法到相应通道,进行样品的固相萃取。
收集的洗脱液用MultiVap-10 50℃氮吹至干,然后用0.2%甲酸水溶液溶解、
定容至1mL,0.22 μm滤膜过滤,高效液相色谱-串联质谱仪分析。
图1固相萃取净化方法
2.2 分析步骤
2.2.1液相条件
色谱柱:Phenomenex KinetexC18 4.6×100 mm 2.6 μm ;
柱温:40℃;
流速:0.6mL/min;
进样量:10μL;
流动相:A相:含5mM甲酸铵和0.1%甲酸水溶液;B相:乙腈
梯度条件:见表1。
表1. 梯度条件
2.2.2 质谱条件
离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;电喷雾电压:5500V;雾化气压力:50psi;辅助气压力:60psi;离子源温度:550℃;采集方式:多反应监测(MRM),质谱参数见表2。
表2. 质谱参数
猪尿样品加标色谱图,见图2。
图2 猪尿样品加标色谱图
称量不含待测物组分的试样各5mL,分别添加三个浓度水平,每水平6个平行样。按照前面处理方法进行样品前处理,按照仪器条件进行测定。结果表明,不同基质分析方法的回收率为82.1%~103.2%,重复性RSD为3.5%~9.4%,回收率和重复性均较好,说明莱伯泰科SPE 1000全自动固相萃取仪、MultiVap-10多通道平行浓缩系统能够高效、稳定地达到实验的要求,适用于猪尿中14种β-受体激动剂残留的样品前处理。
本方法基于国家标准《猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法(农业部1025号公告-11-2008)》和农业行业标准《动物尿液中11中β-受体激动剂的检测(农业部1063号公告-3-2008)》,采用莱伯泰科全自动固相萃取仪SPE1000对尿样进行净化,MultiVap-10平行定量浓缩系统浓缩后用液相色谱质谱检测。该方法能够高效、稳定地达到实验的要求,可以提供领域范围内的良好应用。
综上所述,莱伯泰科SPE 1000全自动固相萃取仪、MultiVap-10多通道平行浓缩系统能够高效、稳定地达到实验的要求,适用于猪尿中14种β-受体激动剂残留的样品前处理。
求,适用于猪尿中14种β-受体激动剂残留的样品前处理。
1、农业部1025号公告-11-2008 猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法;
2、农业部1063号公告-3-2008 动物尿液中11中β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法。
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