2021-01-12 07:55:58, 大昌华嘉 大昌华嘉科学仪器
摘要:
以褐篮子鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明褐篮子鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17770.7mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.37%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的39.27%。
一、样品前处理
1、所用试剂
1.1 浓盐酸,浓度≥36%,优级纯
1.2 6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。
1.3 水:去离子水
1.4 苯酚:须重蒸
1.5 17种氨基酸标准品
2、前处理设备
1) 析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。
2) 水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL
3) 匀浆机。
4) 无油真空泵
5) 干浴水解浓缩仪
6) 移液管
7) 0.22um滤膜
3、样品制备(参考国标GB 5009.124-2016)
原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。
4、试样水解
称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析仪分析方法参数:
1) 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6x20cm
2) 分离程序:
3) 运行时间:经分析时间+再生时间 57min
4) 反应单元温度:135°C。
5) 检测波长:570nm、440nm同时检测。
三、样品中氨基酸含量的计算
样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:
ci = cs /As ×Ai ……………………(2)式中:
ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。
试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:
Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 …………(3)式中:
Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);
ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
F ———稀释倍数;
V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);
M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);
m ———称样量,单位为克(g);
109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;
100 ———换算系数。
附、褐篮子鱼分析图谱及做样结果
全自动氨基酸分析仪
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