2021-01-07 14:20:22 力扬企业有限公司
吡哆醇 (胺) 5''-磷酸酯氧化酶 (PNPO) 缺陷,是一种由 PNPO 活性受损所引起的常染色体隐性癫痫症。
这种疾病对人类生活危害极大,尤其是对于婴幼儿而言,PNPO 缺乏会导致他们患上致命性癫痫性脑病,发生严重的发育迟缓,以及其他神经功能障碍症状。
在人体内,PNPO 可以催化吡哆胺 5''-磷酸 (PMP) 和吡哆醇 5''-磷酸酯 (PNP) 氧化成吡哆醛 5''-磷酸酯 (PLP),即维生素 B6 的活性形式,所以患者通过及时补充大量维生素 B6 的疗法仍然可以进行正常神经发育,因此尽早进行确诊和治疗就显得尤为关键。
可是,想要诊断 PNPO 缺陷并不容易,就目前世界医疗水平来说,是一个极大的挑战,其主要是由于婴儿的多系统病理会使疗效不够迅速全面,此外,治疗方法也会对其他癫痫症产生疗效,因此并不能够从中区分 PNPO 缺陷。
不过通过实验分析可以得知,人体红细胞可以将 PNPO 的底物 PMP 转化成 PLP,但是实验环境与现实还是有所差别,在实验室分析方法需要较大样本量和放射性标记底物,所以并不适用于临床分析。
近几年来兴起的干血点法 (DBS) 给了科学家们一条全新的道路,通过指尖或足跟进行采血,也就是无创采集,制成干血片,这种方法易于运输和保存是它的主要优点,特别适用于临床分析的样本采集。
最終效果怎样才是人们着眼的关键,研究人员利用 PNPO 的活性,通过加入 PNP 底物,在 30 分钟内干血点上的 PLP 的浓度差来测定,提取液用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析。
样品为 18 名 PNPO 基因变异患者,并设立对照组,为 7 名健康成年人,37 名没有 PNPO 缺陷的儿童和 16 名其他癫痫病患者。实验结果表明, (以 pmol DBS–1h-1 为单位) PNPO 缺陷患者中 PNPO 活性显著低于其他对照样本,仅为 1.1 (测试范围:0.0 - 4.8),其他三组对照的平均值则分别为 41.7, 28.3 和 56,不同组别之间的显著差距具有统计学意义,说明该方法可以显著区分和诊断 PNPO 缺陷患者。
利用液相色谱-串联质谱,去分析干血片中 PNPO 活性的方法,步骤简单,且结果精确,不仅大大降低了检测所需要的成本,而且还大大提升了确诊概率,相比其他方法具有良好的区分性,改进了实验室方法中不适合临床应用的部分,在临床诊断 PNPO 缺陷中有巨大的潜力与价值。
参考文献:
http://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acs.analchem.7b01358
Matthew P. W. et al. An LC–MS/MS-Based Method for the Quantification of Pyridox(am)ine 5′-Phosphate Oxidase Activity in Dried Blood Spots from Patients with Epilepsy. Anal. Chem., 2017, 89 (17), 8892–8900. DOI: 10.1021/acs.analchem.7b01358
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