干血点法 (DBS)，PNPO 缺陷的治疗之光

吡哆醇 (胺) 5''-磷酸酯氧化酶 (PNPO) 缺陷，是一种由 PNPO 活性受损所引起的常染色体隐性癫痫症。

这种疾病对人类生活危害极大，尤其是对于婴幼儿而言，PNPO 缺乏会导致他们患上致命性癫痫性脑病，发生严重的发育迟缓，以及其他神经功能障碍症状。

在人体内，PNPO 可以催化吡哆胺 5''-磷酸 (PMP) 和吡哆醇 5''-磷酸酯 (PNP) 氧化成吡哆醛 5''-磷酸酯 (PLP)，即维生素 B6 的活性形式，所以患者通过及时补充大量维生素  B6 的疗法仍然可以进行正常神经发育，因此尽早进行确诊和治疗就显得尤为关键。

可是，想要诊断 PNPO 缺陷并不容易，就目前世界医疗水平来说，是一个极大的挑战，其主要是由于婴儿的多系统病理会使疗效不够迅速全面，此外，治疗方法也会对其他癫痫症产生疗效，因此并不能够从中区分 PNPO 缺陷。

不过通过实验分析可以得知，人体红细胞可以将 PNPO 的底物 PMP 转化成 PLP，但是实验环境与现实还是有所差别，在实验室分析方法需要较大样本量和放射性标记底物，所以并不适用于临床分析。

近几年来兴起的干血点法 (DBS) 给了科学家们一条全新的道路，通过指尖或足跟进行采血，也就是无创采集，制成干血片，这种方法易于运输和保存是它的主要优点，特别适用于临床分析的样本采集。

最終效果怎样才是人们着眼的关键，研究人员利用 PNPO 的活性，通过加入 PNP 底物，在 30 分钟内干血点上的 PLP 的浓度差来测定，提取液用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析。

样品为 18 名 PNPO 基因变异患者，并设立对照组，为 7 名健康成年人，37 名没有 PNPO 缺陷的儿童和 16 名其他癫痫病患者。实验结果表明， (以 pmol DBS–1h-1 为单位) PNPO 缺陷患者中 PNPO 活性显著低于其他对照样本，仅为 1.1 (测试范围：0.0 - 4.8)，其他三组对照的平均值则分别为 41.7， 28.3 和 56，不同组别之间的显著差距具有统计学意义，说明该方法可以显著区分和诊断 PNPO 缺陷患者。

利用液相色谱-串联质谱，去分析干血片中 PNPO 活性的方法，步骤简单，且结果精确，不仅大大降低了检测所需要的成本，而且还大大提升了确诊概率，相比其他方法具有良好的区分性，改进了实验室方法中不适合临床应用的部分，在临床诊断 PNPO 缺陷中有巨大的潜力与价值。