中药抗疫，安全先行 | 中药材的农药残留安全性检测方法

2020-12-16 11:47:10 杭州谱育科技发展有限公司

背景

近日，国家发布了《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第六版）》，其中进一步增加了中药药剂的治疗方案种类以及在不同病情的实践应用。中药已在新冠肺炎的临床治疗中起到了良好的效果，并且得到了较好的验证。这将大大促进我国中药药材的种植、生产和广泛使用。这也意味着，中药材的品质以及安全性检测变得越发重要。

谱育科技结合新冠肺炎第六版中多种中医治疗方案，对常用的中药材黄芪的30种禁用农药及其代谢物进行了检测（依据最新2020中国药典法规新修订的《0212药材和饮片检测通则》）；参照《2341农药残留量测定法》征求意见稿中第五法的仪器参数，30种农药的推荐离子对和色谱条件，依照第五法的样品前处理方式，建立了黄芪药材中30种禁限用农药及代谢物残留量测定的方法。

该方法灵敏度高，重复性好，可对中药材中的多种农残进行准确测定，可有效的保障新冠肺炎中医治疗方案中中药材的安全性。

实验部分

◆ ◆ ◆

1）标准品和试剂

30种农药混标（CDAA-M-490361-JZ-2ml）；甲醇和乙腈为色谱级，室温保存；甲酸和乙酸为LC-MS级，纯度98%，室温保存；甲酸铵为LC-MS级，纯度97%，室温保存。

2）仪器

超高效液相色谱仪（具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器（含冷却功能）、柱温箱）与三重四极杆质谱仪EXPEC-5210联用系统。

图1 EXPEC-5210三重四级杆串联质谱仪

3）液相色谱条件

色谱柱：CNWShell C18液相核壳色谱柱( 2.1 x 100mm 2.6um )

流动相：A相0.1%甲酸溶液(含5mmol/L甲酸铵)；B相乙腈-0.1%甲酸溶液(含5mmol/L甲酸铵) ( 95:5 )

流速：0.3mL/min；柱温：40°C

洗脱方式：采用梯度洗脱，时间程序见表1。

表1 梯度洗脱条件

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	70	30
1	70	30
12	0	100
14	0	100
14.1	70	30
15	70	30

4）质谱条件

离子源为电喷雾(ESI) 离子源，正离子扫描模式。监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。

表2 各化合物监测离子对及参数

编号	化合物	监测离子对	锥孔电压(DP)	碰撞能量（CE）
1	甲胺磷	142.1>125.0 142.1>94.1	30	16 15
2	涕灭威亚砜	207.1>89 207.1>132	35	22 20
3	久效磷	224.0>193.0 224.0>127.0	32	14 17
4	涕灭威砜	240.0>223.0 240.0>86.0	35	11 22
5	杀虫脒	197.1>46.1 197.1>117.1 197.1>152.0	50	45 42 28
6	3-羟基克百威	238.1>163.1 238.1>220.2 238.1>181.1	33	22 15 19
7	硫环磷	256.0>168.1 256.0>140.1	38	31 24
8	苯线磷亚砜	320.1>233.2 320.1>171.2 320.1>292.1	45	32 31 16
9	磷胺	300.0>174.0 300.0>127.0	43	25 26
10	涕灭威	213.1>89.0 213.1>116.2	60	25 16
11	苯线磷砜	336.0>266.1 336.0>188.1	54	26 38
12	甲磺隆	382.1>167.2 382.1>199.1	45	23 31
13	克百威	222.0>123.1 222.0>165.1	35	28 16
14	氯磺隆	358.0>141.2 358.0>167.3	50	30 29
15	甲拌磷亚砜	277.0>171.0 277.0>97.1 277.0>143.1 277.0>199.1	50	15 46 26 15
16	胺苯磺隆	411.1>168.2 411.1>196.2	42	40 22
17	内吸磷	259.0>89.0 259.0>61.0	68	16 43
18	特丁硫磷亚砜	321.1>171.2 321.1>97.0	50	23 31
19	甲拌磷砜	293.1>247.1 293.1>115.1 293.1>171.1	55	12 34 26
20	水胺硫磷	312.0>270.1 312.0>236.2	48	24 23
21	苯线磷	304.0>217.1 304.0>234.2 304.0>202.1	52	32 28 21
22	灭线磷	243.2>97.1 243.2>131.1	54	32 25
23	特丁硫磷砜	321.0>171.2 321.0>87.0	56	15 53
24	氯唑磷	314.0>162.2 314.0>120.1	48	24 42
25	硫线磷	271.1>131.2 271.1>159.1 271.1>97.0	60	30 22 40
26	甲基异柳磷	332.1>273.1 332.1>231.2 332.1>121.1	30	13 17
27	蝇毒磷	363.0>227.1 363.0>307.0	56	39 29
28	地虫硫磷	247.0>109.1 247.0>137.1	42	27 16
29	治螟磷	323.0>97.1 323.0>171.1 323.0>115.0	50	55 23 32
30	甲拌磷	260.9>75.1 260.9>47.0	40	18 55

样品制备

◆ ◆ ◆

供试品溶液：取供试品粉末(过三号筛) 3g，精密称定，置50ml聚苯Z烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/min) 5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4: 1) 7.5g,立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/min)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/min)5分钟，取上清液9ml，置预先装有净化材料的分散固相萃取净化管[无水硫酸镁900mg, N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg,硅胶300mg,石墨化碳黑90mg]中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/min) 5分钟使净化完全，离心(每分钟4000转) 5分钟，精密吸取上清液，置氮吹仪上于40°C水浴浓缩至约0.4ml，加乙腈稀释至1.0ml，涡旋混匀，滤过，取续滤液，即得。

线性范围与检出限

◆ ◆ ◆

标准曲线溶液：30种农药混标用乙腈稀释标准曲线浓度为0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的各标曲溶液，注入液相色谱质谱联用仪。涕灭威、涕灭威亚砜在浓度1-100ng/ml范围内线性相关，甲基异柳磷、内吸磷、地虫硫磷、甲拌磷砜、水胺硫磷在浓度0.5-100ng/mL范围内线性相关，其他农药在浓度0.2-100ng/ml范围内线性相关，相关系数均大于0.99。将标准曲线的低浓度点溶液分别注入液相色谱质谱联用仪，根据各峰信号强度，计算其检出限。结果标明，30种农药的检出限均能满足检测要求。

精密度

◆ ◆ ◆

取混合对照品溶液（甲胺磷, 克百威 , 3-羟基克百威 , 胺苯磺隆, 甲磺隆, 氯磺隆, 蝇毒磷, 磷胺, 涕灭威, 涕灭威砜, 涕灭威亚砜, 水胺硫磷浓度为 5ng/ml；硫环磷, 久效磷浓度为3ng/ml；氯唑磷浓度为1ng/ml，其余化合物浓度为2ng/ml），注入液相色谱质谱联用仪，连进6针，计算峰面积RSD。结果见表3，色谱图见图2。

图2 30种农药MRM谱图（2.0ng/ml）

表3 精密度试验结果（n=6）

序号	化合物	RSD （%）	序号	化合物	RSD （%）
1	甲胺磷	1.18	16	胺苯磺隆	3.14
2	涕灭威亚砜	2.29	17	内吸磷	3.25
3	久效磷	2.89	18	特丁硫磷亚砜	3.40
4	涕灭威砜	3.91	19	甲拌磷砜	5.21
5	杀虫脒	2.72	20	水胺硫磷	3.59
6	3-羟基克百威	3.40	21	苯线磷	4.62
7	硫环磷	4.49	22	灭线磷	3.11
8	苯线磷亚砜	2.24	23	特丁硫磷砜	2.12
9	磷胺	1.23	24	氯唑磷	2.98
10	涕灭威	4.93	25	硫线磷	3.75
11	苯线磷砜	2.66	26	甲基异柳磷	4.54
12	甲磺隆	3.14	27	蝇毒磷	5.77
13	克百威	3.35	28	地虫硫磷	4.22
14	氯磺隆	2.58	29	治螟磷	3.09
15	甲拌磷亚砜	3.12	30	甲拌磷	4.03

加标回收率

◆ ◆ ◆

在供试品溶液中分别加入混合对照品（涕灭威、涕灭威亚砜、甲基异柳磷、内吸磷、地虫硫磷、甲拌磷砜、水胺硫磷加标量为5ug/kg；其余化合物加标量为2ug/kg），各3份，按照方法进行测定，结果见表4。

表4 回收率试验结果

序号	化合物	平均回收率（%）	序号	化合物	平均回收率（%）
1	甲胺磷	86.48	16	胺苯磺隆	93.28
2	涕灭威亚砜	94.15	17	内吸磷	95.54
3	久效磷	100.33	18	特丁硫磷亚砜	104.12
4	涕灭威砜	102.98	19	甲拌磷砜	117.22
5	杀虫脒	79.77	20	水胺硫磷	80.56
6	3-羟基克百威	96.81	21	苯线磷	99.12
7	硫环磷	105.98	22	灭线磷	96.75
8	苯线磷亚砜	82.33	23	特丁硫磷砜	102.22
9	磷胺	95.22	24	氯唑磷	108.12
10	涕灭威	99.42	25	硫线磷	98.22
11	苯线磷砜	87.11	26	甲基异柳磷	71.12
12	甲磺隆	91.12	27	蝇毒磷	90.87
13	克百威	95.12	28	地虫硫磷	89.98
14	氯磺隆	98.99	29	治螟磷	72.12
15	甲拌磷亚砜	99.44	30	甲拌磷	96.33

结果与讨论

◆ ◆ ◆

药材样品提取后，经HLB SPE小柱净化，可在14min内快速、准确对其中的30种农药进行筛查测定。

本文考察了方法的线性、精密度、回收率等。结果表明: 30种农药在检测范围内线性良好，相关系数均大于0.99；方法精密度在5.77%以内，大部分化合物回收率均在70 %~120 %范围内。该方法灵敏度高，重复性好，可准确测定中药材黄芪中的农药残留。使用高灵敏、高抗污染能力的EXPEC 5210系统，可以对中药材及饮片中30种农残进行灵敏、准确的定量检测，为新冠肺炎中医治疗方案中中药材的安全性提供有效保障。

由于篇幅有限，更多其他药材品种（麻黄、人参、柴胡、连翘、甘草等）的农药多残留测定和中药中重金属检测应用案例无法全部展现，如有需要，可联系谱育科技提供。

-END-