氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生（2）

上一期氨基酸分析专题，我们重点关注了氨基酸衍生的得率问题。本期我们将继续对这个话题进行展开。

众所周知，各种氨基酸属于同一类化合物，但是不同氨基酸的结构还是存在差别的，结构差别会影响到他们的衍生速率。如果衍生试剂的量不足，不同氨基酸的得率就会有很大的差异，这势必影响数据的重现性。

为了进一步研究这一问题，我们设计了衍生试剂短缺的实验。实验中，反应快的氨基酸，衍生的比例会更多，峰面积更高；反应慢的氨基酸则峰很小甚至没有。

从下图可以看出，苯丙氨酸和缬氨酸的峰面积远远高于其它氨基酸，因此这两个氨基酸的反应性是最强的。鉴于这种反应速度的差异，保证衍生试剂比例的过量是必须的。

图1. AccqTag试剂不足时衍生氨基酸的色谱图

当衍生试剂足够，且比例超过5时，不论是反应慢的丙氨酸，还是更快反应的苯丙氨酸，都能完全衍生，它们的相对比例自然也是不变的（见图2），这个数据也可以作为我们分析问题的重要依据。

图2. 不同批次衍生氨基酸混标的丙氨酸/苯丙氨酸比例

氨基酸分析FAQ — 确保氨基酸完全衍生