2020-06-26 03:21:44 艾杰尔-飞诺美(Agela & Phenomenex)
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从事中压制备色谱方法的工作者都知道,TLC作为中压制备方法建立的重要参考指标,TLC信息的获取,对于中压制备方法的建立至关重要。合适的梯度方法才能达到提高分离效率,节省时间和物料成本的目的,本期我们就来谈一谈TLC信息的重要性。
首先我们从TLC中需要得出两个重要信息,一是各化合物的Rf值,二是各化合物的组成情况,进而对方法的建立做出判断。
按照经验,我们通常会把目标物的Rf值控制在0.15-0.2之间,以获得最佳的分离度和分离时间。如果Rf值过大,则分离效果不好,过小则洗脱时间太长,会带来时间成本和溶剂的浪费。
这里我们需要引入一个概念就是CV(柱体积)=1/Rf,它表达了化合物的Rf值和对应的洗脱时间之间的关系。也就是说Rf=0.2的化合物,按照展开溶剂比例去洗脱的话,这个化合物可以在5个柱体积洗脱过程被洗脱下来。
同理我们可以通过不同化合物的CV得出理论被洗脱出来所需的柱体积。
在中压制备色谱分离过程中,我们往往只需要关注目标物和其附近的杂质情况,这里我们再引入一个概念就是ΔCV=1/RfB-1/RfA, ΔCV所代表的含义就是目标物和附近杂质经分离之后的柱体积之差。
通过上图我们可以得出,合适的ΔCV可以直观的反映出分离效果的好坏,ΔCV越大,越有助于分离。
由于实际在中压制备填料多为40-60um,由于涡流扩散和传质阻力效应的影响,自身峰宽往往在1.5个柱体积左右,所以为了保证化合物能够实现基线分离,我们至少需要把ΔCV控制在1.5以上。
如果只能控制1<ΔCV<1.5时,就需要进行柱串联,使用更小颗粒的调料,或是减小上样量来提高分离度了。
当ΔCV<1时,那么我们很难在当前条件下获得基线分离的结果,可以尝试筛选一些其他填料的选择性,亦或者通过高压制备色谱来完成。
好吧,可能有些童鞋
觉得上述理论有些过于复杂,
有没有更简便的方法建立方式呢?
当然是有的!
艾杰尔-飞诺美“战神”产品——Astra快速中压制备色谱,软件自带TLC到中压方法一键转换功能,帮您省时省力,快速完成实验分析结果。
如上图所示,我们只需要在软件中输入样品量,展开剂比例和目标物及杂质的Rf值即可一键生成方法,是不是很简单,很方便!
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