蘑菇毒素之质谱分析

夏天是吃蘑菇的好季节。蘑菇种类繁多，一些食用菇味道鲜美，受到各地人们的喜爱，但是可不要采摘或吃到毒蘑菇而中毒。

毒蘑菇又称毒蕈，我国约有100种左右，分布广泛，引起人严重中毒的约有10种，毒性较强的主要有鹅膏肽类毒素（毒肽、鬼笔毒肽和毒伞肽）、鹅膏毒蝇碱、光盖伞素、鹿花毒素、奥来毒素等^[1] ，属于生物碱类的毒物。

在我国鹅膏属中毒占误食野生蕈菌致死数的95%，且一年四季都有，以夏秋季为多见。民间也有各种鉴别毒蘑菇的方法，但总的看来这些方法并不可靠或者难以掌握。如何鉴别蘑菇是否有毒，或者误食中毒后如何快速、高灵敏度检测尿样或血样并进行有效的救治？这里就以鹅膏毒肽的质谱检测技术进行介绍。

仪器：LCMS-8050

色谱柱：XBridge™ BEH C18 3.0 mmI.D.× 150 mm L., 2.5 μm

流动相：A相-0.03%氨水溶液；B相-甲醇

参考前处理：1 g 匀浆后的样品中加入15mL 0.5%盐酸溶液，涡旋后超声提取15 min，用0.5%的盐酸溶液补足至20 mL，涡旋后将混合物离心，取8 mL上清液到另一根干净试管中，加入2 mL二氯甲烷涡旋，之后离心2 min，取水相经HLB固相萃取柱净化、洗脱液用氮气吹干、复溶并涡旋混匀0.1 min，过滤膜后上机测试。

剧毒鹅膏菌中5种鹅膏毒肽色谱图

1 β-Amanitin（鹅膏毒素）
2 α-Amanitin（鹅膏毒素）

3 Phallacidin（类鬼笔毒肽）
4 γ-Amanitin（鹅膏毒素）

5 Phalloidin（鬼笔毒肽）

一旦误食有毒蘑菇造成中毒，因中毒的潜伏期较长，而且部分蘑菇中毒的症状一旦出现就迅速恶化，要及时到医院诊治，医院第一时间收集病人治疗前后的血尿和治疗过程中的血尿，收集保留可疑的毒蘑菇、吃剩的食物残渣、汤汁等。

鹅膏毒肽类毒蘑菇中毒应急检测分析，文献报导常用LCMSMS方法，样本提取后经SPE柱净化后再上机分析，这种方法进行血液病因鉴定的有效时间文献报导为20小时，因仪器灵敏度原因之后很难检测到，而本方法采用在线SPE-LCMSMS进行检测，即使40小时也可以检测血尿样本，灵敏度比文献高10-50倍。

在线SPE-LCMSMS分析生物样本中的蘑菇毒素系统示意图：

仪器：SPE-LCMS-8060

色谱柱：SPE柱：10mm MAYI柱，LC柱：100mm C18柱

流动相：甲醇/水

参考前处理：取0.5 mL血浆，加入1.5mL水（尿液直接2mL）和10 μL甲酸，混匀，上样到HLBSPE小柱（SPE小柱预先用3 mL甲醇和3 mL水活化），待样品溶液流干后用3 mL水淋洗除杂，抽干，2 mL甲醇洗脱被测物，氮气吹干，加水1mL溶解残渣，过膜后上机测定。

以尿中α-鹅膏毒素分析为例^[4]

离线SPE LC-MSMS：

尿中1ng/mL，进样5uL，LOD：0.5ng/mL

尿中1ng/mL，进样50uL（因基体抑制，找不到峰）

在线SPE-LC-MSMS：

尿中1ng/mL进样50uL，LOD：0.02ng/mL

血浆中α-鹅膏毒素实际中毒样品分析结果

温馨提示：

建议大家不要自行采摘、食用野生蘑菇，也不要在移动商贩处购买干或新鲜的蘑菇，以免发生食物中毒。

更多分析数据请登录岛津官网或与岛津相关工作人员联系获取。