GB31660.4-2019：牛奶中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量测定

实验背景

醋酸甲地孕酮与醋酸甲羟孕酮均为人工合成的孕激素,在畜牧业中, 曾被用作动物生长促进剂。但这类药物成分会残留在动物组织中，长期或大量食用含有醋酸甲羟孕酮和醋酸甲地孕酮的食品, 会使人出现内分泌紊乱等一系列症状。

安谱实验根据2019年新国标GB31660.4-2019 《动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，在牛奶基质中使用CNW Poly-Sery MCX小柱进行了实验，发现此方法操作简单，回收率高于85%，重现性好。

接下来，小编带大家走进安谱实验室

一起来学习具体检测方案吧~

一、样品前处理

牛奶基质：

酶解

取试样2g，于50 mL离心管中，加内标外标工作液（样品基质空白加40ul 100ppb内标，样品基质加标加入40ul 100ppb内标+40ul 100ppb混合外标，使最终检测浓度为20ppb）加0.2mol/L乙酸铵缓冲液4 mL，涡旋混匀后加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶（货号CFEQ-4-150001-0002）40μL，于37℃下避光水浴低速振荡，酶解16h。

样品提取

试样经酶解后，加乙酸乙酯10 mL，于旋涡振荡器上剧烈振荡10 min， 4000 r/min离心5 min，取上清液至梨形瓶中。残渣加乙酸乙酯10 mL重复提取1次，合并上清液，50℃旋转蒸发至干。加乙腈10 mL、正己烷5ml使溶解，转至50ml离心管中，低速涡旋10s，3000 r/min离心2 min，弃正己烷层，下层液于50℃旋转蒸发至干，加30%甲醇水溶液3 mL，溶解，备用待上样。

二、小柱操作

SBEQ-CA3279  CNW Poly-Sery MCX 混合型强阳离子交换 SPE 小柱 60mg， 3mL/50pcs

活化：3mL甲醇

平衡：3mL水

上样：待测液

淋洗：3mL水，3mL50%甲醇水，淋洗后抽干

洗脱：5mL甲醇

浓缩：氮吹吹干，用0.2 mL乙腈（80%）-0.1%甲酸溶液溶解残余物，涡旋混匀，过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱-串联质谱仪测定。

三、LCMS/MS测定条件

液相条件

色谱柱：Athena C18（2.1*50mm，1.8um）

柱温：30℃

进样量：10ul

流动相：

时间A: 0.1%甲酸水B: 0.1%甲酸乙腈0min80200.5min80203min10903.5min80207min8020

质谱参数

离子源： ESI

扫描方式：正离子模式

检测方式：MRM

电离电压：4000V

离子源温度：100℃

雾化温度：330℃

定性定量离子

醋酸甲地孕酮：385/267（定性定量）385/325（定性）

甲羟孕酮乙酸酯（醋酸甲羟孕酮）：387/285（定性）387/327（定性定量）

甲地孕酮乙酸酯-D3：388/270（定性定量）

四、实验谱图

1. 标品谱图（20ppb）

2. 牛奶基质空白谱图

3. 牛奶基质加标20ppb

五、实验数据

基质样品名称

醋酸甲地孕酮

加标回收率

醋酸甲羟孕酮

加标回收

牛奶加标185%99%加标291%100%平均值88%100%

注：本次实验牛奶基质空白中未检测到醋酸甲地孕酮，醋酸甲羟孕酮的含量为0.095ug/kg 。

六、实验耗材 

本次实验所用耗材如下，供大家参考：

货号名称规格品牌

SBEQ-CA3279

CNW Poly-Sery MCX 混合型强阳离子交换 SPE 小柱

60mg， 3mL/50 pcs

CNW

CDCT-C14861300

乙酸甲地孕酮（醋酸甲地孕酮） 标准品

纯品型，有证书，0.1g

Dr

CDCT-C14852015

甲羟孕酮乙酸酯（醋酸甲羟孕酮） 标准品

纯品型，有证书，0.1g

Dr

CDAA-S-590046D3-JA-1ml

甲地孕酮乙酸酯-D3（GB 31660.4-2019）

100mg/L于乙腈，1ml

ANPEL

CAEQ-4-014048-4000

HPLC级乙酸乙酯

4L

CNW

CFEQ-4-150001-0002

β-葡萄糖醛苷酸酶，>100，000units/ml，芳基硫酸酯酶<20，000units/mL

2mL

CNW

SBEQ-CG1012

CNW G系列12位固相萃取真空装置

玻璃缸（内）长*宽*高=16.2*7.5*15.5cm，12位

CNW

SCAA-104

有机相尼龙针式滤器 （绿色）

13mm*0.22um， 100 只/ 罐

ANPEL

QBAA-002012

2ml 无针注射器

100 只/ 包

ANPEL

ABEQ-3300002-25

CNW 50ml 尖底离心管

25/袋

CNW

ADEQ-2600111

3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未灭菌

500/ 箱

CNW

VAAP-32009E-1232A-100

CNW 9mm 透明螺纹口自动进样瓶( 带刻度、书写)

2ml，12*32mm， 9mm，100 只/ 盒

CNW

关于安谱实验

安谱实验简介

上海安谱实验科技股份有限公司，于1997年组建成立，总部位于上海，目前拥有500多位员工，是中国领先的实验用品供应链管理服务商，同时是一家集研发、生产与销售以及客户供应链管理为一体的综合性企业。

主要产品

主要产品包括化学试剂、标准品、气相色谱相关耗材、液相色谱相关耗材、样品前处理产品、实验室通用耗材、小型仪器等。

热线电话：400-863-0099 

电商平台：www.anpel.com.cn

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