2020-04-22 07:51:09 上海安谱实验科技股份有限公司
实验背景
醋酸甲地孕酮与醋酸甲羟孕酮均为人工合成的孕激素,在畜牧业中, 曾被用作动物生长促进剂。但这类药物成分会残留在动物组织中,长期或大量食用含有醋酸甲羟孕酮和醋酸甲地孕酮的食品, 会使人出现内分泌紊乱等一系列症状。
安谱实验根据2019年新国标GB31660.4-2019 《动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,在牛奶基质中使用CNW Poly-Sery MCX小柱进行了实验,发现此方法操作简单,回收率高于85%,重现性好。
接下来,小编带大家走进安谱实验室
一起来学习具体检测方案吧~
一、样品前处理
牛奶基质:
酶解
取试样2g,于50 mL离心管中,加内标外标工作液(样品基质空白加40ul 100ppb内标,样品基质加标加入40ul 100ppb内标+40ul 100ppb混合外标,使最终检测浓度为20ppb)加0.2mol/L乙酸铵缓冲液4 mL,涡旋混匀后加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶(货号CFEQ-4-150001-0002)40μL,于37℃下避光水浴低速振荡,酶解16h。
样品提取
试样经酶解后,加乙酸乙酯10 mL,于旋涡振荡器上剧烈振荡10 min, 4000 r/min离心5 min,取上清液至梨形瓶中。残渣加乙酸乙酯10 mL重复提取1次,合并上清液,50℃旋转蒸发至干。加乙腈10 mL、正己烷5ml使溶解,转至50ml离心管中,低速涡旋10s,3000 r/min离心2 min,弃正己烷层,下层液于50℃旋转蒸发至干,加30%甲醇水溶液3 mL,溶解,备用待上样。
二、小柱操作
SBEQ-CA3279 CNW Poly-Sery MCX 混合型强阳离子交换 SPE 小柱 60mg, 3mL/50pcs
活化:3mL甲醇
平衡:3mL水
上样:待测液
淋洗:3mL水,3mL50%甲醇水,淋洗后抽干
洗脱:5mL甲醇
浓缩:氮吹吹干,用0.2 mL乙腈(80%)-0.1%甲酸溶液溶解残余物,涡旋混匀,过0.22 μm滤膜,供高效液相色谱-串联质谱仪测定。
三、LCMS/MS测定条件
液相条件
色谱柱:Athena C18(2.1*50mm,1.8um)
柱温:30℃
进样量:10ul
流动相:
时间A: 0.1%甲酸水B: 0.1%甲酸乙腈0min80200.5min80203min10903.5min80207min8020
质谱参数
离子源: ESI
扫描方式:正离子模式
检测方式:MRM
电离电压:4000V
离子源温度:100℃
雾化温度:330℃
定性定量离子
醋酸甲地孕酮:385/267(定性定量)385/325(定性)
甲羟孕酮乙酸酯(醋酸甲羟孕酮):387/285(定性)387/327(定性定量)
甲地孕酮乙酸酯-D3:388/270(定性定量)
四、实验谱图
1. 标品谱图(20ppb)
2. 牛奶基质空白谱图
3. 牛奶基质加标20ppb
五、实验数据
基质样品名称
醋酸甲地孕酮
加标回收率
醋酸甲羟孕酮
加标回收
牛奶加标185%99%加标291%100%平均值88%100%
注:本次实验牛奶基质空白中未检测到醋酸甲地孕酮,醋酸甲羟孕酮的含量为0.095ug/kg 。
六、实验耗材
本次实验所用耗材如下,供大家参考:
货号名称规格品牌
SBEQ-CA3279
CNW Poly-Sery MCX 混合型强阳离子交换 SPE 小柱
60mg, 3mL/50 pcs
CNW
CDCT-C14861300
乙酸甲地孕酮(醋酸甲地孕酮) 标准品
纯品型,有证书,0.1g
Dr
CDCT-C14852015
甲羟孕酮乙酸酯(醋酸甲羟孕酮) 标准品
纯品型,有证书,0.1g
Dr
CDAA-S-590046D3-JA-1ml
甲地孕酮乙酸酯-D3(GB 31660.4-2019)
100mg/L于乙腈,1ml
ANPEL
CAEQ-4-014048-4000
HPLC级乙酸乙酯
4L
CNW
CFEQ-4-150001-0002
β-葡萄糖醛苷酸酶,>100,000units/ml,芳基硫酸酯酶<20,000units/mL
2mL
CNW
SBEQ-CG1012
CNW G系列12位固相萃取真空装置
玻璃缸(内)长*宽*高=16.2*7.5*15.5cm,12位
CNW
SCAA-104
有机相尼龙针式滤器 (绿色)
13mm*0.22um, 100 只/ 罐
ANPEL
QBAA-002012
2ml 无针注射器
100 只/ 包
ANPEL
ABEQ-3300002-25
CNW 50ml 尖底离心管
25/袋
CNW
ADEQ-2600111
3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未灭菌
500/ 箱
CNW
VAAP-32009E-1232A-100
CNW 9mm 透明螺纹口自动进样瓶( 带刻度、书写)
2ml,12*32mm, 9mm,100 只/ 盒
CNW
关于安谱实验
安谱实验简介
上海安谱实验科技股份有限公司,于1997年组建成立,总部位于上海,目前拥有500多位员工,是中国领先的实验用品供应链管理服务商,同时是一家集研发、生产与销售以及客户供应链管理为一体的综合性企业。
主要产品
主要产品包括化学试剂、标准品、气相色谱相关耗材、液相色谱相关耗材、样品前处理产品、实验室通用耗材、小型仪器等。
热线电话:400-863-0099
电商平台:www.anpel.com.cn
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