四小名助 | 动物源性食品中β-受体激动剂类药物残留的测定

2018-11-10 12:26:22, 彭倩赛默飞色谱与质谱分析

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彭倩

又到周五啦！四小名助如约而至，给大家带来色谱耗材相关的实用技术小贴士。内容涉及色谱柱及前处理产品选择、使用、维护保养等内容。实用干货，不容错过！

本周新知

β-受体激动剂，又称为β-兴奋剂（β－agonists）是一类人工合成药物，主要用于防治人、兽支气管哮喘和支气管痉挛，在药学上称为β-肾上腺素兴奋剂。β-受体激动剂在体育比赛中可用于增强运动员、动物(如马)肌肉，提高运动成绩，国际奥委会将β-受体激动剂列为禁用药物。β-受体激动剂根据苯环取代基结构分为苯胺型（如：克伦特罗，俗称：瘦肉精）、苯酚型（沙丁胺醇）、间苯二酚型（如：特布他林）。

80年代，国内外研究表明，在饲料中添加β-受体激动剂具有营养再分配作用，可以明显提高瘦肉率。1992年，西班牙首次发生物多人食用含β-受体激动剂的畜产品中毒事件；1997年，香港发生进食大陆供港猪的内脏引起人中毒等事件。随着中国加入WTO后，国外对于中国出口的食品提出更高的要求，我国因兽药残留问题出口欧盟肉制品也屡次受阻；普通大众也需要无公害食品。因此，对β－受体激动剂的分析研究不仅在临床药物代谢动力学上、体育运动中，而且在食品安全方面都有重要意义。目前，我国对β-受体激动剂的检测方法主要有GB/T 22286-2008 动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法及GB/T 21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法等。

本方法建立了β-受体激动剂药物药物在猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品中的LC/MS/MS检测方法，其基本原理为：组织样品中的β-受体激动剂残留药物经酶解，用高氯酸调节pH值后，在酸性条件下沉淀蛋白，上清液用Retain-CX固相萃取柱净化，Hypersil Gold HPLC色谱柱分离，高效液相色谱－串联质谱（LC/MS/MS）法检测。方法灵敏度、提取回收率、重现性等均满足国内外监控和检测要求。

样品前处理

酶解

动物源性样品2g（精确到0.01g）于50mL 离心管中，加入0.2mol/L 乙酸胺溶液（pH5.2）10mL 然后加入β- 盐酸葡萄糖醛苷酶/ 芳基硫酸酯酶40μL，涡旋混匀3min，于37℃下水浴避光振荡16h。

提取

样品酶解后放置至室温，涡旋混匀3min，高速离心10min，取出上清液，加入1mol/L 高氯酸溶液1mL，涡旋，混匀，高速离心10min 后，转移上清液至另一50mL离心管内。

SPE操作步骤

200mg 3mL HyperSep Retain-CX 固相萃取柱

(货号：60107-304)

活化

3mL 甲醇，3mL 水，3mL 0.5mol/L 高氯酸

上样

将上清液上样至小柱中（1d/s）

清洗

3mL 水，3mL 甲醇，柱子抽干

洗脱

3mL 5% 氨水甲醇溶液

仪器条件

色谱条件

色谱柱：Hypersil Gold，5μm，2.1×150mm（货号：25005-152130）

流动相A: 水（5mM 乙酸铵） B: 甲醇

梯度洗脱程序

进样量：10μL

流速：250μL/min

质谱条件

电喷雾电离源（ESI），正离子模式

选择反应监控（SRM）扫描模式

喷雾电压：4500V

离子传输管温度：350℃

实验谱图

β- 受体激动剂药物LC/MS/MS 色谱图（1ng/mL）

实验数据

回收率：75-120%

定量限（LOQ）：本方法沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、喷布特罗和心得安在猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品组织中的定量限均可达0.1μg/kg，西马特罗、特布他林为0.5 μg/kg。

结论

本方法建立了β-受体激动剂药物药物在猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品中的LC/MS/MS检测方法，其基本原理为：组织样品中的β-受体激动剂残留药物经酶解，用高氯调节pH值后，在酸性条件下沉淀蛋白，上清液再用Retain-CX固相萃取柱净化，Hypersil Gold HPLC色谱柱分离，高效液相色谱－串联质谱（LC/MS/MS）法检测。提取回收率均可达75-120%，满足国内外的最低检出限要求，并且定量定性准确，重现性好。

应用编号：CCS-SP-001

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