镍柱的清洗和保养

1. 对于一般的预装柱（Crude系列除外），上样前，样品需要使用0.22μm/0.45μm滤膜进行过滤或者离心处理，以避免样品中有细胞碎片等固体物质，堵塞柱子。

2. 如果细胞裂解后非常粘稠，需考虑是否因为DNA、RNA这类核酸物质过多，需要加入核酸酶去除，以降低样品粘稠度，提高上样速度及洗脱效果。

3. 柱子使用过程中，不能超过填料的压力，以免填料被压塌。

4. 每次使用后，可使用5-10倍柱体积的纯水或者结合缓冲溶液对柱子进行清洗。（如果出现载量严重下降或者压力增加，需考虑彻底清洗）

常规柱子（除了Ni excel）如出现反压严重升高或者柱子明显颜色改变，说明柱子需要进行彻底的清洗。

1. 脱镍：

(1) 脱镍缓冲液：20mM 磷酸缓冲液，0.5M NaCl，50mM EDTA，pH 7.4。

(2) 使用5-10个柱体积的脱镍缓冲液冲洗柱子，

(3) 然后再用5-10个柱体积的水冲洗柱子。

2. 去除沉淀蛋白、疏水性蛋白及脂蛋白：将柱子置换到1M NaOH中，室温1-2小时（若需要去除内毒素可延长至12小时），再用5-10个体积去离子水冲洗。

3. 去除强离子吸附蛋白：使用1.5M NaCl洗柱子，约10-15分钟，然后用大约10个体积去离子水冲洗。

4. 挂镍：加入0.5ml（1ml柱子）或者2.5ml（5ml柱子）0.1M的NiSO₄，使用5个柱体积的去离子水冲洗，再用缓冲液冲洗5个柱体积，最后置换到20%乙醇中保存。

可以定期使用NaOH进行彻底的在位清洗。使用NaOH能够比较彻底地清除各类蛋白的杂质，便于延长柱子的使用寿命。使用不同样本中间，加入洗涤步骤，可以避免互相之间的交叉污染。具体清洗步骤如下：

1. 针对强离子结合的蛋白，用1.5M NaCl 清洗多个柱体积，再用用约10个柱体积的去离子水或者平衡缓冲液清洗。

2. 针对沉淀蛋白、疏水性蛋白、脂蛋白，用1M NaOH保存柱子1-2小时（如果需要去内毒素，可以延长至12-24小时），再用约10个体积的去离子水或者平衡缓冲液冲洗。

3. 针对强疏水性蛋白、脂蛋白、脂类，使用5-10个柱体积的30%异丙醇冲洗约15-20分钟，再用10个柱体积的去离子水或者平衡缓冲液冲洗。

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