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疫苗抗原蛋白含量和纯度分析

导读

疫苗中抗原蛋白的含量与疫苗的有效性直接相关，组分疫苗的纯度与联合疫苗的真实抗原比例直接相关。在提升疫苗质量、加强疫苗质量评价力度的呼声中，测定疫苗成品中抗原蛋白含量和组分疫苗纯度的需求日益迫切。岛津疫苗行业组采用以高灵敏度、高稳定性和长期耐用性好著称的岛津液相色谱串联质谱仪（图1），发展抗原蛋白含量测定方法包，并将其用于百白破疫苗成品中多种抗原蛋白的同时定量以及组分百白破疫苗的纯度分析。该方法包可有效弥补ELISA法不适合不同厂家产品对比和Lowry法不适合多蛋白同时定量的不足，为疫苗质量提升提供新思路。

图1 岛津液相色谱串联质谱仪

多种抗原蛋白的同时定量

百白破疫苗是多种抗原蛋白与铝佐剂结合后形成的联合疫苗，抗原蛋白包括百日咳抗原蛋白、白喉类毒素和破伤风类毒素。百日咳抗原蛋白种类较多且性质相似，难以通过常规方法实现多种抗原蛋白同时定量。

岛津疫苗行业组以液相色谱质谱为基础，发展了百日咳疫苗中多种抗原蛋白（PT、FHA、PRN、FIM和争议蛋白ACT）的同时定量方法（图2），并用于百白破疫苗的质量评价（表1）。如表1所示，组分疫苗具有较好的抗原蛋白完整性和批次重复性；共纯化疫苗的批次重复性稍弱，但也不乏可将重复性做的较好的疫苗厂家，如厂家5。

图2 百日咳部分抗原蛋白检测图

表1 百白破疫苗中抗原蛋白的含量测定

组分百日咳疫苗纯度分析

组分百日咳疫苗的纯度决定了疫苗终产品中抗原比例是否符合理论添加值，即25:25:8。组分的纯度较低，将导致该组分在终产品中含量较低，从而无法实现预期的免疫作用。组分纯度高，但在其它组分中有残留，将导致终产品中该组分的含量偏高。

岛津疫苗行业组以液相色谱质谱为基础，发展了百日咳疫苗中多种抗原蛋白的同时定量方法包，并用于组分百日咳疫苗纯度评价。表2和表3分别测定了不同厂家、不同批次组分百日咳疫苗抗原蛋白。表2中所示厂家PT纯度较低，有明显的FHA残留，纯化工艺有待提高。相比PT，FHA的纯化更为容易，无论是厂家1还是厂家2的FHA中均无其它蛋白的明显残留；厂家1和厂家2的PRN产品中虽然都有FHA残留，但纯度均大于99%。所有组分疫苗中均无FIM和ACT检出。

表2 厂家1组分疫苗抗原纯度

表3 厂家2 组分疫苗抗原纯度

撰稿人：龙珍