Follow me~ 轻松帮你搞定蜂蜜中残留抗生素检测

在养蜂生产过程中，四环素类抗生素（Tetracyclines，TCs）通常被用来治疗或预防蜜蜂美洲幼虫腐臭病或欧洲幼虫腐臭病，但同时也造成了蜂产品中TCs残留。在蜂蜜的加工储存过程中，在合适的温度、酸度、水环境下，TCs会发生较大程度的差向异构化，生成差向异构体(ETCs)，ETCs毒性甚至比药物原形更强。因此，有必要对蜂产品中TCs进行监测，防止TCs对人体可能造成的伤害。

本实验参考标准GB/T 18932.23-2003 蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法 液相色谱-串联质谱法，利用普立泰科公司全自动固相萃取仪SPE 432对蜂蜜中4种四环素类抗生素残留进行萃取，LC-MS/MS分析检测。实验结果表明该方法回收率在85.78%-95.84%之间，且具有较好的平行性，适合蜂蜜、蜂王浆等类物质的兽药残留分析。

SPE 432 全自动固相萃取仪

（北京普立泰科仪器有限公司）

仪器设备与试剂

- 仪器设备

SPE 432 全自动固相萃取仪

（北京普立泰科仪器有限公司）

三重四极杆液相色谱质谱联用仪（赛默飞世尔）

萃取柱：HLB 柱（60 mg，3 mL）

- 试剂

提取液：Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液

甲醇：HPLC级

水：超纯水

实验方法

- 提取

准确称取蜂蜜样品5g（精确到0.01g），加入15mL样品提取液，涡旋混匀1min，离心后过滤取上清液，待净化。

- 净化

将过滤后的上清液置于全自动固相萃取仪中，净化步骤设置如下图所示，收集洗脱液进行氮气吹干，用甲醇：水（3:7）定容至1mL，LC-MS/MS检测。

- LC-MS/MS条件

色谱柱：Varian C18

流动相：0.1%甲酸：甲醇（梯度洗脱）

离解电压：2.5kV

鞘气流速：55arb

辅助气流速：10arb

进样量：25uL

表1 待测兽残物质的出峰时间及主要特征离子

实验结果

四种物质的色谱图出峰时间如下图所示。

图1 四环素类物质色谱图

- 加标回收率结果

LC-MS/MS测定蜂蜜中4种兽残的回收结果如表2所示，加标回收率平均值为85.78%-95.84%，RSD%为6.27%-9.79%。

表2 蜂蜜中四环素类物质的回收率结果

结果与讨论

本文参考GB/T 18932.23-2003 蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法 液相色谱-串联质谱法，使用普立泰科全自动固相萃取仪SPE 432对蜂蜜中四环素类物质进行萃取处理，氮吹仪浓缩仪后，LC-MS/MS检测得到回收率范围为85.78%-95.84%，RSD为6.27%-9.79%，回收率高，重现性良好，说明全自动固相萃取仪SPE 432适用于蜂蜜、蜂王浆等样品中兽残类物质的前处理分析。

仪器特点

l  四通道正压过柱，精确控制流速

l  样品、收集架适配通用的15ml、50ml 离心管，无需特别定制，节省成本

l  收集管与氮吹浓缩仪EVA 32通用，无需样品转移即可进行浓缩步骤，节省人力，避免样品损失

l  开放式平台，15mL、50mL 样品架、收集架，可根据方法需要任意组合使用，无需重新定位，适用不同的应用方法，灵活可靠。

l 独立清洗槽，清洗针内外壁，隔绝交叉污

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