超高效液相色谱质谱联用方法测定肿瘤标记物

2019-02-20 09:22:58, Waters 沃特世科技(上海)有限公司


关于肾上腺嗜铬细胞瘤和神经节瘤(PPGLs)

肾上腺嗜铬细胞瘤和神经节瘤 (PPGLs) 是两种罕见的肾上腺肿瘤, 临床上分泌大量的儿茶酚胺激素引起高血压及其他剧烈的心血管症状,若不及时治疗,可增加患者的心血管疾病风险,甚至导致死亡。90%的病人可成功切除肿瘤而治愈。 

PPGLs的生物标记物包括儿茶酚胺类(肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺)和变肾上腺素类(变肾上腺素、去甲变肾上腺素和 3-甲氧酪胺)。早期 PPGLs 的生化诊断主要通过测定血浆或尿液中儿茶酚胺类或是变肾上腺素类, 用于诊断肿瘤的存在与否。 

2014年,美国内分泌学会(The Endocrine Society)发布嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊治临床实践指南,发表于2014年6月刊《临床内分泌学和新陈代谢杂志》。目前该指南已经明确建议PPGLs的生化诊断采用LC-MS/MS或ECD方法。 

检测难点和最新解决方案

这类化合物的分析检测存在多个难点,如极性小分子,常规反相C18保留较弱;儿茶酚胺类易降解,样品需要特殊处理等。沃特世对血浆或尿液中儿茶酚胺或变肾上腺素类的测定可提供完整解决方案,包括从样品前处理、UPLC®色谱分离到质谱检测。该方法灵敏,快速,分析时间为4 min。变肾上腺素、去甲变肾上腺素、3-甲氧酪胺和多巴胺的灵敏度可达10 pg/mL,肾上腺素和去甲肾上腺素的灵敏度可达50 pg/mL。

  • 样品前处理Oasis® SPE板对目标物有浓缩富集作用,经过Oasis SPE处理后的样品更干净,基质效应小,回收率稳定;同时低量的洗脱液还可以直接进样,省去耗时的吹干步骤,也避免了挥干过程中待测物的损失,极大提高了样品通量。 

  • 色谱分离:HILIC 模式色谱柱下,洗脱液可直接进样,增加 ESI 灵敏度,并改善峰形;同时肾上腺素和去甲变肾上腺素在 HILIC 模式下可以实现更好的分离。

  • 质谱检测:具有StepWave™专利离子传输技术的Xevo® TQ-S质谱仪,灵敏度高,稳定性好,能充分满足儿茶酚胺类和变肾上腺素类在血浆等基质中检测要求。 

该方法采用了已被CFDA批准用于体外诊断的ACQUITY UPLC® I-Class IVD/Xevo TQ-S IVD系统,结合HILIC模式色谱柱、Oasis SPE以及结合正确的MS碎片离子,构成了沃特世PPGLs生物标记物测定的完整解决方案,可为这些生物标记物的测定提供理想的灵敏度和色谱峰形。

沃特世提供以下四种解决方案,包含详细的血浆或尿液样品前处理方法、液相方法和质谱方法: 

1. 血浆中三种变肾上腺素类同时测定(720004613ZH)

2. 血浆中两种变肾上腺素类同时测定(720004822EN)

3. 尿液中儿茶酚胺和变肾上腺素类共6种同时测定(720005093ZH)

4. 血浆中儿茶酚胺和变肾上腺素类共6种同时测定(720005094ZH)

* 您可以登录沃特世官网搜索上述文献编号浏览完整解决方案。


血浆中儿茶酚胺和变肾上腺素类共6种同时测定的血浆样品色谱图

如需了解更多详细信息,敬请联系沃特世工作人员:mimi_wan@waters.com

LC-MS/MS原理

1906年Thomson发明了质谱技术,1989年第一台商业化液相色谱串联质谱仪问世。经过百年的发展,液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)越来越广泛应用于药物、食品、环境、法医、临床等各个领域。

液相色谱串联质谱中,液相色谱负责分离待测物与干扰物,质谱负责检测。样品进样后首先在流动相的携带下进入色谱柱,经过色谱柱分离后,进入质谱进行检测。

质谱根据被测物的质荷比(m/z)进行检测,被测物在离子源转换成气相离子进入质谱,在三重四级杆中一级质谱扫描特定范围离子或允许特定离子进入碰撞室,在碰撞室内分子离子碰撞裂解,形成子离子进入二级质谱,二级质谱扫描特定范围离子或允许特定离子进入检测器。

LC-MS/MS具有灵敏度高,选择性强,准确性好等特点,在临床检测上适用范围远远超过放射性免疫检测和化学检测范围,是其他方法无可比拟的。 


技术优势
  • 检测结果更准确LC-MS监测待测物原型及其特征性碎片,特异性更好,克服了免疫学方法交叉免疫反应的问题;

  • 检测速度更快LC-MS可同时检测上千种待测物,各检测通道之间不存在干扰,同一个方法可适用于一类待测物;

  • 检测成本更低LC-MS前处理耗材,检测试剂成本仅为免疫学方法的十分之一。




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