人参中皂苷的检测

人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研究的目标。因为人参皂苷影响了多重的代谢通路，所以其效能也是复杂的，而且各种人参皂苷的单体成分是难以分离出来的。其中皂苷re可以抑制中枢神经，促进DNA，RNA合成。升高血浆皮质酮的作用，扩张血管。

1.1仪器与试剂

HPSE高效溶剂萃取仪（莱伯泰科公司）；

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

LC600 二元高压梯度高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

C18-U固相萃取柱（6mL，500mg ，莱伯泰科公司）；

甲醇（色谱纯 ）；

乙腈（色谱纯 ）；

乙醇（色谱纯 ）；

超纯水（实验室制备）。

1.2皂苷re标准液配置

 准确称取皂苷re标准品15.0mg，配置于50mL容量瓶中，用5%甲醇水溶液定溶，质量浓度为300ug/mL。

1.3人参样品处理

1.3.1 提取

选用22mLHPSE萃取罐，首先加入3g氧化铝用于吸附油脂，将10g人参样品和硅藻土混合，一同加入HPSE萃取罐，用硅藻土补填满，覆上玻璃纤维滤膜，加载仪器运行，如图1。

HPSE仪器萃取条件：温度120℃，压力10.34MPa，静态萃取时间6min，循环2次，淋洗60%萃取罐体积，萃取溶剂甲醇。

收集萃取液40℃浓缩近干，加水定容至20ml，待净化。

图1 皂苷粉末样品经过HPSE提取

1.3.2净化

固相萃取仪器操作界面如图2。

活化：临用前将5mL超纯水、10mL甲醇和10mL超纯水分别以3mL/min过柱；

上样：取2mL提取液过柱，流速不大于2mL/min；

淋洗：用6mL超纯水淋洗小柱，2mL/min，氮气吹干10秒；

洗脱：用5mL75%乙醇以2mL/min洗脱，重复一次，合并洗脱液，氮吹浓缩至2mL待分析。

图2 SPE1000固相萃取仪器操作界面

2.1浓缩液经过0.22um滤膜过滤，待液相色谱分析。

2.2液相色谱条件

色谱柱  C18（150×4.6 mm，5 um）

流动相  乙腈 : 水=2 : 8（v/v）

流速    1.0 mL/min

柱温    30 ℃

检测器  UV  203 nm

进样量  20uL

2.3定量测定

分别将150ug/mL和300ug/mL皂苷re标准样品进液相色谱分析，重叠后如下图3，图4包含6次SPE1000回收谱图和1次标准品谱图，表1是皂苷标准品浓度80ug/mL经过SPE1000固相萃取回收率。

图3 皂苷re标准谱图

图4 皂re固相萃取回收谱图

表1空白加标80ug/mL回收率

2.4 样品分析

人参样品提取液和标准品300ug/mL谱图叠加，如图5。

图5 标浓度300ug/mL和提取液谱图对比

2.5 样品回收

用SPE1000全自动固相萃取仪净化人参样品提取液，上样量2mL，经过活化、上样、淋洗、洗脱，收集洗脱液浓缩至4ml，液相色谱分析，SPE净化前（黑色谱图）与净化后（红色谱图）谱图叠加对比如图6。

图6 样品净化前后谱图对比

2.6 样品提取液过柱回收率数据

表2样品过柱回收率

2.7样品加标回收

取1mL人参提取液，加入1mL皂苷re标准品（浓度300ug/mL），混匀至2mL作为上样液，SPE过程如1.3.2净化，6次谱图叠加如图7，数据如表3。

图7 样品加标净化后谱图重叠

表3样品加标过柱回收率

本方法使用SPE1000全自动高通量柱膜通用固相萃取系统净化人参皂苷re，标准品回收率在99.6%~102.8%，RSD为1.26%，人参样品提取液回收率在97.9%~103.2%，RSD为1.24%，提取液加标回收率在95.4%~101.5%，RSD为1.92%，结果满足实验需求，实验可行，避免人工操作繁琐的问题。

      撰稿人：张珑