4000+ 次进样，稳定如一：Aurora Rapid 8×75 XT 色谱柱应用速递

在大规模蛋白质组学研究中，通量和灵敏度固然重要，但更难长期保证的是 LC-MS 系统在数千次进样中的一致性。对于单细胞蛋白质组学、临床大队列和纵向研究而言，色谱柱能否在长时间运行中持续保持稳定背压、保留时间与峰形，直接影响数据质量、定量可靠性和后续生物学解释。

本期应用文献速递聚焦 IonOpticks Aurora Rapid 8 cm × 75 µm XT column 在 4000+ 次进样中的长期稳定性表现。该应用文档展示了色谱柱在高通量单细胞蛋白质组学工作流中的柱寿命、背压稳定性、保留时间稳定性和 QC 定量重复性。

01｜真实高负载场景：4000+ 样本单细胞蛋白质组学数据集

本研究采用 Aurora Rapid 8 cm × 75 µm XT column 与 trap column，配合 Thermo Scientific Vanquish Neo UHPLC 和 Thermo Scientific Orbitrap Astral MS，对 4000+ 样本单细胞蛋白质组学数据集进行分析。

为持续监控系统状态，本实验在每约 60 次单细胞样本运行后插入一次 HeLa tryptic peptide digest QC（50 pg），并使用 144 SPD 方法进行质量控制；整个队列共完成 63 次 QC 运行。

实验设计与系统配置：Aurora® Rapid™ 8×75 XT column、HeatSync™ Column Heater、Vanquish Neo LC 与 Orbitrap Astral MS。

02｜高通量下的稳定检测：蛋白质组与肽段数量可靠稳定

在 144 SPD 方法下，HeLa 50 pg QC 运行于整个 4000+ 样本队列中保持稳定识别能力：每次运行持续鉴定超过 3,000 个 unique protein groups 和超过 15,000 条 unique peptides。

这意味着在高通量梯度和长周期使用条件下，色谱系统仍能维持较高灵敏度与识别能力，为大规模蛋白质组学数据采集提供稳定基础。

高通量识别能力：routine HeLa QC runs 在 4000+ 样本队列中持续获得稳定识别结果。

03｜背压稳定：长周期运行中的柱稳定性关键指标

背压是评估纳流 LC 系统稳定性和色谱柱状态的重要指标。本实验通过提取 QC 运行中的 5 分钟背压值进行监测，结果显示在 4000 次进样过程中背压保持稳定。

稳定背压反映出 Aurora Rapid8×75 XT column 在长时间使用中的稳定性与耐用性，有助于降低长周期实验中的方法漂移风险。

背压稳定性：4000 次进样期间，QC 样本背压值保持一致。

04｜保留时间稳定：增强大队列结果的可比性

对于大队列蛋白质组学，保留时间漂移越小，越有利于跨批次峰识别、定量比对和下游统计分析。本次实验监测了在所有 QC 运行中都可检出的 10 条代表性肽段。

结果显示，这些肽段在 4000 次连续进样中的保留时间保持高度一致，漂移较小，体现了色谱重复性对高可信结果的重要支撑。

保留时间稳定性：10 条代表性肽段在 4000 次进样中的保留时间表现稳定。

05｜QC 重复性与窄峰宽：让定量更有信心

63 次 HeLa QC 的蛋白强度定量相关性矩阵显示，平均 Pearson 相关系数超过 0.99，表明 QC 注射之间具有高度一致的定量表现。

同时，FWHM 中位数保持稳定且峰宽较窄，说明峰形尖锐、重复性良好。这对于需要长期运行和可靠定量的大规模工作流尤为关键。

QC 重复性与峰宽表现：平均 Pearson 相关性 >0.99，FWHM 保持稳定。

06｜方法概览：稳定性来自系统级优化

本文中的色谱分离在 Thermo Scientific Vanquish Neo UHPLC 系统上完成，Aurora Rapi 8 cm × 75 µm XT column 设定为 50 °C，并采用反向冲洗 trap-and-elute 配置。

质谱采集使用 Thermo Scientific Orbitrap Astral MS；原始数据由 Spectronaut 20.2 分析。该组合为高通量、长周期单细胞蛋白质组学实验提供了系统级稳定性验证。

方法与产品场景：Aurora® Rapid™ 8×75 XT 与 HeatSync™ 柱温系统。

结语｜面向大规模、高通量与纵向研究的可靠选择

在 4000+ 次进样的长周期运行中，Aurora Rapid8×75 XT column 可持续保持稳定背压、保留时间和检测灵敏度，并在 QC 注射中呈现高度可重复的蛋白质定量结果。

这一表现对于需要长期运行、批次一致性和可靠定量的单细胞蛋白质组学、大队列研究及纵向项目具有重要意义。

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