内参选不对，实验全白费？这份避坑指南请收好！

选择分子量与靶蛋白差距大于 5 kDa 的内参，避免条带“打架”或融合，结果更清晰。

• 靶标 40 kDa → 用 GAPDH（36 kDa）就不太合适

• 靶标 55 kDa → 用 Tubulin（50–55 kDa）也容易撞车

根据样品的类型和靶蛋白的细胞定位，选择具有高表达水平的组成型内参抗体。比如，如果样品是细胞裂解液，细胞质蛋白可以选择GAPDH或Beta-tubulin、β-Actin，核蛋白可以选择Histone H3等；如果样本是线粒体裂解液，则可以选用线粒体内高表达的细胞色素C等。

内参蛋白并非所有情况都适用！GAPDH 在缺氧、糖尿病、代谢相关实验中表达会变化，因此GAPDH一般不适合用作代谢相关研究的内参蛋白。可以通过取相同量的不同实验条件下的裂解物或样本，进行蛋白质免疫印迹确定。

如果您要进行多重免疫印迹（同时使用靶向目标蛋白和内参蛋白的一抗），内参抗体与目标蛋白一抗的宿主必须不同。否则二抗会交叉反应，引发背景或串色。

研究磷酸化、泛素化等 PTM 时，最好使用对应的未修饰蛋白作为内参。例如检测 p38 的磷酸化推荐用总 p38，而不是 GAPDH/Tubulin。

人细胞、小鼠组织混用？在研究跨物种的蛋白质时，选择具有适当跨物种反应性的内参。

✅ 总结：内参选择不是一成不变的，需要结合具体情况而论。选对内参，WB 才能稳、准、可靠。以下常用内参蛋白供你收藏！

11 月 3 日 – 12 月 31 日