平台介绍|基于MRM方法的胆汁酸定量检测技术

2025-08-29 14:02:37, 优优标志物上海氨探生物科技有限公司

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背景介绍

胆汁酸是肝脏合成的关键代谢物，参与脂肪消化、能量代谢等多项重要生理过程，其代谢稳态与健康息息相关。近年来，研究发现胆汁酸代谢紊乱与肝胆疾病、肠道疾病、代谢综合征以及部分神经系统疾病密切相关，这些疾病往往伴随着特征性的胆汁酸谱异常。然而，胆汁酸种类繁多，浓度差异大，且易受外界因素干扰，传统检测方法难以实现精准定量。在此背景下，靶向代谢组学技术应运而生。凭借其高特异性和高灵敏度，靶向代谢组学技术能够精准解析胆汁酸的代谢规律，挖掘其与疾病的内在关联，为临床诊断提供可靠的量化依据，成为研究胆汁酸代谢及疾病机制的关键工具，为健康研究开辟了新的路径。

靶向胆汁酸代谢组学方法的建立

本方法选取了35种分析代谢物及7种相应内标，通过高灵敏度的串联四级杆质谱优化其离子对，成功建立了代谢物的多反应监测（MRM）方法。相关参数如Q1及Q3质荷比、质谱碰撞电压和色谱保留时间等详细信息见表1。实验过程中，首先将代谢物标准品从储备液稀释至1-5000 ng/mL的线性浓度范围，然后在经预处理，最后在Ultimate™ 3000超高效液相色谱仪与TSQ Endura高分辨率质谱仪联用系统上进行检测。所有代谢物均通过反相色谱实现分离，并采用正、负离子同时检测模式进行分析。采用内标法进行定量。

表1代谢物MRM参数

靶向胆汁酸代谢组学检测特色

1.标曲绝对定量：针对每种物质，独立构建标曲，实现胆汁酸的绝对定量，定量精度更精准；

图1 部分胆汁酸标曲

2.采用同位素内标定量（添加多种同位素内标，提高定性定量准确性）：通过整合多重稳定同位素标记内标构建多维质控体系，可有效消除基质效应并校正系统误差，从而显著提升代谢组学分析中胆汁酸检测的定性鉴别能力与定量精准度。

3.严格的质量控制体系保证数据结果的可靠性：采用5%大鼠血浆作为替代基质，可有效消除基质效应；该方法的线性范围为 1–5000 ng/mL，相关系数（R²）≥0.98，标准曲线结果见下表2。

表2标准曲线结果信息表

总结

优优标志物平台开发的基于 MRM（多反应监测）技术的胆汁酸定量检测方案，通过特异性检测与标准品校准，可实现生物样本中多种胆汁酸的精准绝对定量并获取具体浓度。该技术相比传统方法优势显著：具备高特异性以排除基质干扰、高灵敏度以检测低浓度成分，且支持多组分同时分析。其标准化流程涵盖样本前处理、标准品与内标优化选择、LC-MS/MS 检测分析及数据精准解析等关键环节。凭借高精准性和适用性，该技术应用前景广泛，可助力疾病机制研究、诊断标志物发现，服务药物研发与疗效评价，并为个性化医疗提供参考。

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参考文献

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